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Leachii支原体(Mycoplasma Leachii)是一类可以引起母牛流产和乳房炎以及犊牛多发性关节炎和肺炎等疾病的动物病原体。属于支原体科(Mycoplasmataceae),支原体属(Mycoplasma),“丝状支原体族(Mycoplasma mycoides)”成员之一。Leachii支原体首次在澳大利亚昆士兰患关节炎的犊牛关节液内获得分离,代表菌株是PG50,但是该病在我国尚未见报道。本研究对我国某奶牛场的犊牛多发性关节炎病情进行跟踪调查,该奶牛场300余头新生母犊牛全部发生严重的多发性关节炎,部分发病犊牛因多种并发症而死亡,未死亡犊牛因关节受到不可逆性损伤,最终被淘汰。发病犊牛的症状与最早发生于澳大利亚的犊牛Leachii支原体关节炎非常相似。为确定引起该病的病原体,我们进行病原的分离和鉴定。首先,将无菌采集的关节液接种于普通肉汤、脑心浸汤、厌氧肉肝汤,均未见微生物生长。表明该病并非细菌性病原导致。其次,我们应用支原体培养方法对病料进行病原分离培养,分离获得2株能够稳定传代的支原体。经三次克隆纯化之后进行后续鉴定。在含1%营养琼脂的固体培养基上培养之后可形成肉眼可见的针尖大小菌落。在40倍光学显微镜下可观察到典型的“油煎蛋”状大小不一的菌落形态。对分离培养物进行电子显微镜观察,可见典型支原体菌体形态,呈棒状、丝状等多形性。生化试验表明所分离的2株支原体均发酵葡萄糖、不水解精氨酸和尿素。应用支原体16S rRNA基因和LppA基因特异性引物对关节液样品和纯培养物进行PCR扩增,均扩增出与预期大小一致的DNA片段。核苷酸序列分析结果显示,16S rRNA基因和LppA基因核苷酸序列均与最初分离于澳大利亚的Leachii支原体(PG50)具有最高的同源性,分别为99.9%和99.6%。最后,将分离物关节内接种于健康犊牛可成功复制出犊牛多发性关节炎症状。结果显示,本研究分离的2株支原体为Leachii支原体,分别命名为GN407和GN408。综合分析发病犊牛的临床病理学观察和关节液样品的实验室诊断结果,我们确定Leachii支原体为该奶牛场犊牛多发性关节炎的病因。