论文部分内容阅读
前言 缺血性脑血管病是常见病、多发病，其致死率与致残率均很高，是导致患者致残和认知功能障碍的主要原因，是威胁人们健康和导致生活质量下降的主要疾病之一。吸烟是缺血性脑血管病的危险因素，近年来的研究提示，粘附分子及细胞因子在缺血性脑血管病的形成中起重要作用，吸烟可引起血管内皮损伤及动脉粥样硬化，其病理变化与粘附分子及细胞因子有密切关系。 粘附分子是由细胞产生，能介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间相互接触和结合的一类分子。其中与动脉硬化及脑血管病发生研究较多的为细胞间粘附分子(ICAM-1)、血管细胞间粘附分子-1(VCAM-1)、E-选择素(E-selectin)、P-选择素(P-selectin)等。E-selectin能介导多形核白细胞与内皮细胞的起始粘附。缺血性脑血管病的形成与白细胞、血小板及血管内皮细胞表面的粘附分子有密切关系，即粘附分子促进白细胞、血小板聚集于血管内皮细胞，引起血流障碍，使缺血性脑损伤加重。 在缺血性脑血管病的形成过程中，肿瘤坏死因子(TNF-α)是造成损伤的重要因素。TNF-α在缺血性脑血管病中的作用日益受到众多学者的重视，TNF-α能够刺激血管内皮细胞表达粘附分子，介导白细胞与血管内皮细胞的粘附。 本实验通过大鼠吸烟模型，应用免疫组织化学方法研究吸烟对动物脑组织中E-selectin和TNF-α的表达影响，探讨E-selectin及TNF-α在吸烟引起脑血管病方面的可能机制，为缺血性脑血管病的预防和治疗提供理论依据。 材料和方法 二．实验材料：健康wistar大鼠60只，由中国医科大学实验动物中心提供，实验用烟为市售某牌香烟，自制 80 x 60 x 58cm’的烟箱，E－selectin、TNF－a单克隆抗体及 SABC试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。 2．实验方法：健康 SIStal大鼠 60只，随机分成六组／组：正常对照组中组：非吸烟对照组人组：短期吸烟组中组：长期小量吸烟组在组：长期大量吸烟组J组：戒烟组。长期大量组、短期吸烟组、戒烟组每次吸烟10支，长期小量吸烟组每次吸烟4支，每组每天吸烟两次，每次30分钟，两次间隔4小时。长期组吸烟三个月，短期组吸烟一个月，戒烟组吸烟一个月，戒烟一个月。各组实验动物在各时间点，经10％水含氯醛麻醉，以150毫升肝素化生理盐水和4％多聚甲醛250Inl进行灌流固定，将固定后的标本，常规进行水洗，材料脱水、浸蜡、包埋，在石蜡切片机上切取冠状脑片，连续切片 10张，厚度约 5 pm，分别行 HE染色，E＊elechn及’YNF－a免疫组化染色。免疫组化染色采用SABC法，DAB显色，光学显微镜下观察各组免疫组化切片阳性反应物沉积情况，在切片白皮质处观测5个不重复高倍视野，分别计数E1elechn各组阳性血管内皮细胞数及TNF－a阳性细胞数，实验数据以均数。标准差表示，用SPSS统计软件进行方差分析，应用q检验，做组间两两分析比较，P＜0．05有统计学意义。 实验结果 二．E＊electin免疫组化结果：E＊electin阳性细胞呈棕色，主要表达在血管内皮细胞。A组及B组平均每5个视野血管内皮细胞无表达或偶有l一二个血管内皮细胞表达，A为两组比较无差异河＞0．05人吸烟各组表达均升高，分别与A在组比较有明显差 ·2·异（P＜0．05）＊组较C、D上组表达减少（P＜0．05）。 2．’INF－a免疫组化结果：TNF－a阳性细胞呈棕色，阳性细胞为神经元、脑胶质细胞和血管内皮细胞，A组及B组平均每5个视野有少量阳性细胞表达。A在两组比较无差异（P＞o．仍人吸烟各组表达均升高，分另与A在组比较有明显差异（P＜o．05＊F组较C、D＊组表达减少（P＜0．05）。 讨 论 吸烟是促进脑梗死形成的重要危险因素，吸烟引起缺血性脑血管病的确切机制不清楚，大量研究表明粘附分子及炎性细胞因子介导的炎性反应在脑梗死形成中起着重要作用，研究吸烟后E＊elechn和’YNF－。的变化对探讨吸烟引起脑梗死发病机制有重要意义。 香烟燃烧的烟雾可分为气体和微粒两部分，超过4000多种有害物质已被证实，其中主要的有毒复合物包括一氧化碳（CO人尼古丁和焦油。CO进入人体后大部分与红细胞内血红蛋白结合，形成碳氧血红蛋白（COHB人引起缺氧和血管损伤。此外，尼古丁和焦油等有害物质可直接损害血管内皮细胞，导致血管内皮功能失调。目前，普遍认为，血管内皮细胞不仅是血管腔内的一层保护细胞，而且有抗凝、抗血栓形成及纤溶等广泛生理功能，并且广泛参与了许多疾病的病理过程，内皮细胞损伤是动脉粥样硬化及脑梗死的早期病变和基本动因。本实验发现E－selechn主要表达在活化的血管内皮细胞上。各个吸烟组脑组织中均有 E－selectin表达，与对照组比较有显著升高，戒烟后E－selechn表达与各吸烟组比较表达下降。结果提示。吸烟可使脑组织E－selechn升高。吸烟对E－selectin的影响以及发生的机制可能与香烟的毒性成份造成血管内皮细