NGF及其受体Trk-A、p75与病理性瘢痕痒痛的相关性研究

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神经生长因子(NGF)是最早被发现的神经肽类物质,也是神经系统中最重要的生物活性分子之一,是神经系统维持功能的重要因子,可以促进神经元的存活与分化,营养成熟的神经元,维持其正常功能,参与损伤神经的再生和功能修复,在瘢痕形成过程中NGF及其受体对胶原祖细胞起促分化作用,它不仅与瘢痕胶原沉积有关联,也与病理性瘢痕痒痛有着密切的关系,体外实验证明NGF能够促进创伤组织中肥大细胞脱颗粒释放5-HT等致痒物质,促进Substance P等神经肽类物质的增加,NGF还能够改变伤害感受器的痛阈,使疼痛感受放大,或发生无原因的疼痛感。实验目的:本研究通过HE染色技术、免疫组化技术、甲苯胺蓝染色技术,检测NGF及其受体在伴随或不伴随痒痛的病理性瘢痕中的分布情况和肥大细胞脱颗粒情况,分析NGF及其受体与病理性瘢痕痒痛的关系。实验方法::收集临床病理性瘫痕切除手术后标本19例,分为A、B两组:A有痒痛的病理性瘢痕,B无痒痛的瘫痕。将所取标本于10%的中性福尔马林中固定48小时以上,常规梯度酒精脱水,浸蜡包埋切片,每个样本做25个切片,分别做苏木精一伊红(HE)染色(5个)和免疫组织化学(NGF、Trka、p75各5个)、甲苯胺蓝染色(5个)。NGF及其受体免疫组化染色阳性信号为黄褐色颗粒。NGF及其受体、肥大细胞脱颗粒现象图像分析方法:①在400倍显微镜下分别观察各组中呈棕黄色的NGF阳性颗粒个数,并利用Image一ProPlus6.0图像分析系统进行计数。每张切片观察5个视野取其均数进行比较。②利用Image一ProPlus6.0图像分析系统,将NGF及其受体的表达强度用IOD值表示,每张切片各取五个视野,分别测定每个视野的平均光密度、IOD值,取其平均值作为该标本的平均光密度和IOD值,分别进行比较。③取两组切片观察甲苯胺蓝染色结果,观察肥大细胞脱颗粒程度,用Image一ProPlus6.0图像分析系统计算阳性颗粒数、面积、平均光密度和积分光密度。结果:一、HE染色光镜下可见病理性瘫痕中,矮柱状的基底层细胞和真皮相连接,呈嗜碱性。其细胞间连接较松散,颗粒层细胞呈较扁的梭形,核与细胞器退化,透明层与角质层变薄。见大量沉积的胶原呈现粉红色,染色深,较不规则,并可见血管,偶可见渗出的炎性细胞,毛细血管扩张。成纤维细胞比较发达,核较小,着色较深,细胞质较多,呈弱嗜碱性,数量多。二、NGF免疫组画染色图像分析:有痒痛症状的瘢痕中,NGF及其受体Trka、p75的阳性颗粒数、平均光密度、积分光密度明显高于无痒痛症状的瘢痕组,相比较明显有统计学意义(p<0.05)。三、有痒痛症状的瘢痕中,肥大细胞脱颗粒阳性数、染色积分光密度为明显高于无痒痛症状的瘢痕组相比较明显有统计学意义(p<0.05)。结论:1被染成棕色的NGF及其受体的阳性颗粒物质存在于有痒痛和无痒痛的病理性瘢痕组织内。2有痒痛的病理性瘢痕中NGF及其受体Trka、p75阳性颗粒数较多、密度高、着色深,有统计学差异。3有痒痛的病理性瘢痕中,肥大细胞脱颗粒现象明显。有统计学差异。随着对NGF及其受体在中枢神经之外的作用的进一步研究,明确其在病理性瘢痕形成和病理性瘢痕痒痛症状中的作用,从免疫化学角度分析瘢痕痒痛症状的发生。进而推进临床治疗各种瘢痕痒痛症状的药物研究,使NGF及其受体应用的前景更加广阔。
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