应用重组腺伴随病毒技术研究丙型肝炎病毒核心蛋白的致癌作用

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该文首先应用PCR技术从含HCVla型全部结构基因和非结构基因cDNA的质粒中无隆出完整HCVCore区基因片段,测序结果表明该片段第84位碱基由T-C,但不影响其编码的氨基酸(Gly),碱基符合率99﹪以上,氨基酸符合率100﹪,为进一步实验提供了基础.随后,我们应用原核表达载体pBV220,用温度诱导在大肠杆菌中高效表达了HCVCore区基因,SDS-PAGE结果显示特异性蛋白约21KD,占菌体蛋白总量的13.84﹪.这种以非融合蛋白形式表达的HCVCore蛋白,经间接ELISA法检测表明具有较高免疫活性,抗原效价可达1:1600.该蛋白主要以包函体形式存在,可经复性以可溶性蛋白存在于复性后上清中.实验表明HCVCore区基因可在原核细胞中正确的转录、翻译和加工,其结构、功能更接近于自然.同时进一步验证所获得的HCVCore区基因正确性,也为开发丙肝检测试剂提供帮助.最后,我们应用腺伴随病毒载体介导的病毒重组技术,成功地将HCVCore区基因转导入大鼠肝脏之中并在鼠肝细胞中获得持续表达.该实验进一步提供了HCVCore蛋白可能具有直接致癌性的新证据,建立了持续表达HCVCore蛋白的小动物模型,为更深入的研究准备了必要条件,这对HCV相磁肝细胞癌的预防和治疗具有较大的理论和实际意义.同时,扩大了AAV载体进行基因转移的应用范围,探索了肿瘤病因学研究的新思路.
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