焦虑症(anxiety disorder)是一种常见的精神类疾病,随着社会压力的日益加大,发病率逐渐升高。它是以发作性或持续性情绪焦虑和紧张为主要临床表现的神经症,其病理机制尚未彻底阐明。中医将焦虑症归属于情志病范围,患者多因情致失调、肝气郁结、心神不宁、气血失和等,导致焦虑临床症状的产生。复方马蹄香抗焦虑胶囊来源于临床有效方剂马蹄香抗焦虑复方,由蜘蛛香、合欢皮、炒酸枣仁、灯心草四味药组成,以疏肝解郁,养血安神为治则,对于治疗肝气郁结、心神不宁型焦虑症有积极作用。本课题在前期组方优化和药学研究基础上,采用现代医学研究方法对复方马蹄香抗焦虑胶囊进行了初步药效学、作用机制以及安全性早期评价的研究,旨在研制出一种新型、低毒和独特的抗焦虑候选中药,并为后续的“新药临床前研究”及“新药临床研究”奠定基础。主要研究内容及结果如下：1药理毒理研究1.1药效学实验研究采用高架十字迷宫实验(EPM)、Vogel饮水冲突实验、五甲烯四氮唑(PTZ)辨别刺激拮抗实验、开场实验和急性应激后高架十字迷宫实验评价了复方马蹄香抗焦虑胶囊的抗焦虑作用。大鼠高架十字迷宫实验证明复方马蹄香抗焦虑胶囊剂量为3g/kg/d时,在不提高动物活动性的前提下,能显著增加进入开臂时间和次数百分比,有稳定可靠的抗焦虑作用。Vogel饮水冲突实验结果显示,与对照组相比,复方马蹄香抗焦虑胶囊的不同剂量均可显著增加电击情况下大鼠的饮水次数,同时也排除了自发饮水量和痛阈等假阳性的干扰。PTZ辨别刺激拮抗实验结果表明,中剂量组和高剂量组大鼠辨别戊四唑反应的正确率有所下降,随着治疗天数的增加,疗效明显,并且高剂量组下降的百分率大于中剂量组,结果表明：复方马蹄香抗焦虑胶囊在五甲烯四氮唑辨别刺激模型上有抗焦虑作用。开场实验结果表明,复方马蹄香抗焦虑胶囊对其活动性无明显影响。大鼠急性应激后高架十字迷宫实验表明动物在给予应激束缚后,在高架十字迷宫模型上出现了过度的焦虑,在开臂的探索活动明显受到抑制,而复方马蹄香抗焦虑胶囊能明显的提高束缚动物在开臂的探索活动,缓解焦虑状态。1.2急性毒性实验研究复方马蹄香抗焦虑胶囊小鼠最大耐受量为44g/kg,等同于临床拟用量的100倍(人体重按70kg计)。初步显示复方马蹄香抗焦虑胶囊的安全性。2机理探讨2.1复方马蹄香抗焦虑胶囊对γ—氨基丁酸能(GABA)神经通路的影响通过氟马西尼结合测定实验得出复方马蹄香抗焦虑胶囊与GABA受体具有高度亲和力,提示复方马蹄香抗焦虑胶囊的抗焦虑作用可能通过调节GABA受体发挥作用。采用荧光定量PCR技术研究了复方马蹄香抗焦虑胶囊对急性应激大鼠脑组织GABAA受体mRNA表达的影响,结果表明,复方马蹄香抗焦虑胶囊中剂量和高剂量组均能不同程度的使a2-GABAA和a3-GABAA受体表达上调。说明复方马蹄香抗焦虑胶囊可通过上调a2-GABAA和a3-GABAA受体表达而增强GABA转导效应,发挥其抗焦虑作用。2.2复方马蹄香抗焦虑胶囊对急性应激后EPM大鼠海马Cdk5/p35通路的影响采用蛋白质印迹测定法研究了复方马蹄香抗焦虑胶囊对急性应激后EPM大鼠海马Cdk5/p35通路的影响,结果显示,与束缚组相比,地西泮组、复方马蹄香抗焦虑胶囊中剂量和高剂量组均使大鼠的Cdk5和p35表达水平明显下降,且差异显著,而与p39的表达水平无关。这表明,Cdk5/p35依赖性的因子参与急性焦虑信号,复方马蹄香抗焦虑胶囊可通过调节Cdk5/p35产生抗焦虑作用。此外,文献报道,Cdk5/p35通路与抑制性氨基酸GABA和兴奋性氨基酸谷氨酸(Glu)关系密切,Cdk5通路上调能激活谷氨酸,降低GABA的表达。实验证明复方马蹄香抗焦虑胶囊对GABA通路和Cdk5通路均有显著的影响,那么很有可能通过对它们的相互作用而发挥其抗焦虑作用。2.3复方马蹄香抗焦虑胶囊对急性应激后EPM大鼠海马和皮层单胺类递质的影响采用酶联免疫吸附测定法研究了复方马蹄香抗焦虑胶囊对急性应激后EPM大鼠海马和皮层单胺类递质的影响,结果显示,复方马蹄香抗焦虑胶囊中剂量组和高剂量组可不同程度降低大鼠海马及皮层组织中的单胺类递质去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)含量,而对大鼠海马和皮层组织中多巴胺的含量无显著影响。提示抑制脑组织中5-HT、NE等神经递质的释放可能是其抗焦虑作用的重要机制。2.4复方马蹄香抗焦虑胶囊对急性应激后EPM大鼠血清免疫因子的影响采用酶联免疫吸附测定法研究了复方马蹄香抗焦虑胶囊对急性应激后EPM大鼠血清免疫因子的影响,结果表明应激后,血清中白介素1β(IL-1β)、细胞肿瘤因子a(TNF-α)、白介素6(IL-6)均升高,提示急性心理应激可以引起机体自然免疫功能的增强。同时发现,复方马蹄香抗焦虑胶囊可降低大鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6,改善焦虑状态出现的免疫功能紊乱。3结论采用大鼠高架十字迷宫、Vogel饮水冲突、PTZ辨别刺激拮抗、开场和束缚应激实验,从非条件反射模型和条件反射型惩罚性模型等不同角度观察复方马蹄香抗焦虑胶囊的抗焦虑作用,大大增加了药效学评价的可靠性。通过机制实验表明：复方马蹄香抗焦虑胶囊发挥抗焦虑作用主要通过上调a2-GABAA和α3-GABAA受体表达而增强GABA转导效应；影响Cdk5/p35通路的表达；抑制脑组织中5-HT、NE等神经递质的释放以及调节免疫状态来实现的。通过本课题的研究,为中药复方抗焦虑药效系统研究和机理研究的深入进行提供了思路。