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目的：利用大肠杆菌表达系统表达带两种融合标签的GPC3蛋白，并进行初步纯化，用于后续的免疫和筛选，制备抗GPC3单克隆抗体。 方法：设计引物后，用逆转录聚合酶链反应法从人胚胎肾细胞(HEK293细胞)中扩增GPC3142.263基因片段。将纯化回收的PCR产物克隆进pET32a和pGEX-4T-1两种原核表达载体，经菌液PCR、双酶切和基因测序验证，构建重组质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，先进行小量诱导，分别于37℃和30℃，150rpm，IPTG诱导5h，优化诱导条件，构建出合适的表达体系，筛选出高表达的工程菌。筛出的阳性工程菌在构建的大肠杆菌表达系统中进行大量诱导，表达两种重组蛋白，SDS-PAGE分析检测表达产物。表达的包涵体产物经冻融超声破菌，包涵体的洗涤和溶解，得到初步纯化的重组蛋白，最后进行Westernblot分析检测。 结果：成功克隆了GPC3基因，构建出重组质粒pET32a-GPC3和pGEX-4T-1-GPC3，建立了两株高表达工程菌BL21.pET32a-GPC3和BL21-pGEX-4T-1-GPC3，表达出了带两种标签的GPC3融合蛋白，并进行了初步纯化。 结论：在大肠杆菌中成功表达了两种标签的GPC3融合蛋白，经初步纯化后可用于后续制备抗GPC3单克隆抗体的免疫和检测筛选，为最终能研制出HCC早期诊断试剂盒应用于HCC的早期诊断奠定了基础。