Wnt信号通路是存在于脊椎和无脊椎动物中高度保守的信号通路,可分为两种,分别为依赖β-catenin的经典途径和不依赖β-catenin的非经典途径。Wnt信号通路在胚胎发育、组织稳态、细胞分化和细胞增殖等过程中发挥重要作用,该通路的异常活化与肿瘤的发生发展密切相关。目前关于Wnt信号通路与疾病相互作用的研究多集中在人类以及小鼠疾病,与动物疫病相关性研究较少。J亚群禽白血病（ALV-J）是家禽常见的肿瘤疾病之一,由于目前暂时没有疫苗及药物进行防控,净化鸡群是主要的防控手段。关于禽白血病致瘤和免疫抑制机制的研究甚少,本研究主要关注病毒编码蛋白对Wnt信号通路的影响,进而探究是否参与通路的调控从而影响细胞生长周期及肿瘤的形成。目前关于其他病毒编码蛋白与Wnt信号通路的相互作用已有相关研究。丙型肝炎病毒（HCV）1b基因核心蛋白通过激活Wnt信号通路,抑制细胞的凋亡,促进肝癌形成;乙型肝炎病毒X蛋白诱导Wnt信号通路异常活化,促进细胞增殖,从而参与肝癌形成。本研究通过双荧光素酶报告检测技术、荧光定量PCR技术、流式细胞技术等,研究ALV-J编码蛋白对信号通路的影响,并且通过在细胞中过表达β-catenin,激活信号通路的情况下,研究病毒编码蛋白对信号通路的影响,为进一步探究ALV-J感染引起的家禽肿瘤疾病与Wnt信号通路之间的相互作用机制奠定基础。1.ALV-J编码蛋白对Wnt信号通路的影响为研究病毒编码蛋白与信号通路的相互关系,首先用全病毒感染CEF细胞,通过双荧光素酶和荧光定量PCR检测Top flash活性和信号通路下游相关基因表达水平,从而反映病毒感染细胞中信号通路的活化水平。实验结果显示与低滴度MOI=0.1的实验组相比,MOI=1.0组Top flash活性明显增强,并且信号通路下游基因LEF-1、TCF-4、AXIN、β-catenin、c-myc、cyclinD1 表达量高于低滴度组,说明 ALV-J 全病毒MOI=1.0感染CEF细胞可激活信号通路。CEF细胞中过表达病毒编码蛋白检测信号通路下游相关基因的表达水平,结果显示P27可引起通路下游重要转录因子β-catenin的升高,提示P27蛋白可能激活信号通路,P2、P12、P15、Gp37下调β-catenin的表达,提示可能抑制信号通路的活化。流式检测病毒编码蛋白对细胞周期的影响,结果显示病毒编码蛋白P2、P10、P12、P15、P27、P68、Gp37、Gp85可使S期和G2期的细胞比例增多,以上实验结果提示P27可能通过激活信号通路从而使S期和G2期的细胞比例升高,从而加快病毒复制。2.过表达β-catenin细胞中病毒编码蛋白对信号通路的影响为进一步探究病毒编码蛋白是否可以促进Wnt信号通路的活化,首先构建pCAGGS-β-catenin真核表达质粒转染CEF细胞,利用Top flash活性检测,证实过表达β-catenin能够激活信号通路。然后将β-catenin与病毒编码蛋白共转染至CEF细胞中,荧光定量PCR检测通路下游相关基因的表达情况。结果显示信号通路下游相关基因β-catenin、LEF-1、TCF-4、AXIN、c-myc的表达量都有不同程度的上升,细胞周期相关基因CCND1、CCNE1、CDK2、CDK6表达量上升,提示在过表达β-catenin细胞中,ALV-J编码的10个蛋白均可促进信号通路的活化。3.核衣壳蛋白P27慢病毒载体的构建及其在LMH细胞中的表达前两部分研究内容结果显示病毒编码蛋白P27可上调β-catenin的表达,使S期细胞比例增多,利于病毒的复制。因此,为了进一步研究P27在信号通路中的生物学功能,构建了表达衣壳蛋白P27慢病毒载体,并且将293T细胞包装上清感染禽源LMH细胞,在基因和蛋白水平成功检测到P27的表达。实验结果表明表达P27的慢病毒载体构建成功,并且组装成功的慢病毒可以感染禽源LMH细胞,这一结果为进一步深入研究P27生物学功能提供技术工具。