【摘 要】
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目的甲状腺相关眼病（thyroid-associated ophthalmopathy,TAO）的发生和自身免疫功能紊乱相关。有关TAO和Graves’病的最新研究表明IL-17A可能参与了TAO自身免疫的发生。在本课题中,我们研究TAO中产生IL-17A的T细胞的致病作用以及Th17细胞如何影响眼眶成纤维细胞（orbital fibroblast,OF）不同亚群和纤维细胞的功能。材料与方法1.收
【基金项目】
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国家高科技研究发展计划（863计划）（No.2015AA020311）； 国家自然科学基金（No.81320108010,81470622）；
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目的甲状腺相关眼病（thyroid-associated ophthalmopathy,TAO）的发生和自身免疫功能紊乱相关。有关TAO和Graves’病的最新研究表明IL-17A可能参与了TAO自身免疫的发生。在本课题中,我们研究TAO中产生IL-17A的T细胞的致病作用以及Th17细胞如何影响眼眶成纤维细胞（orbital fibroblast,OF）不同亚群和纤维细胞的功能。材料与方法1.收集TAO患者和健康对照人群的血样并做ELISA和流式细胞技术检测。使用IL-17A刺激从手术标本中培养的原代OF并进一步通过实时荧光PCR,细胞因子特异的ELISA,流式细胞技术和Wester blotting来检测。2.我们分析了TAO患者和健康对照人群的外周血和眼眶组织中Th17细胞,Treg细胞和纤维细胞的表型。进一步研究了在OF和纤维细胞中,IL-17A调控下的炎症反应,纤维化和成脂分化过程。通过Luminex多因子检测和pathscan细胞内信号转导检测来揭示TAO中Th17细胞,OF以及纤维细胞之间的调控环路。结果1.我们的结果表明,分泌IL-17A的T细胞比例在TAO患者中显著升高,TAO患者的眼眶中有CD4+和CD8+T细胞浸润。相比于健康对照人群,TAO的眼眶组织表达更多的IL-17A受体,IL-17A及其相关的细胞因子,呈现明显的纤维化改变。此外,我们证实了IL-17A能够促进OF的炎症反应功能,同时刺激OF,而不是眼睑成纤维细胞,分泌细胞外基质。IL-17A对OF的促炎和促纤维化机制主要依赖于MAPK通路的活化。我们观察到泛素化特异性蛋白酶4抑制剂vialinin A可以下调TAO患者体内RORγt的表达并降低IL-17A的水平。2.我们的结果显示,致病性Th17细胞和分泌细胞因子的纤维细胞在TAO患者中升高。TAO患者的眼眶高表达共刺激分子并且可以在IL-17A的刺激下进一步上调。大部分TAO眼眶脂肪结缔组织来源的OF是CD34+CD90+细胞。我们的研究表明CD34+细胞亚群在IL-17A刺激或是和Th17细胞体外共培养的条件下表现出更为活跃的功能,而与纤维细胞或者OF直接接触后,Th17细胞能够进一步被活化。我们还揭示了OF的细胞表面分子CD90影响着它们向肌成纤维细胞或是脂肪细胞分化。IL-17A促进CD90+OF发生纤维化,但是通过不同的途径抑制TAO的成脂分化过程。结论1.分泌IL-17A的T细胞可能参与了TAO的炎症反应和纤维化变性的病理过程。此外,vialinin A对RORγt表达的抑制作用表明它或许可以在未来成为一种TAO和其他自身免疫性疾病治疗的新型用药。2.Th17细胞,纤维细胞和OF之间的调控环路会导致TAO中的眼眶炎症反应和组织重塑。深入理解IL-17A调控下的OF异质性会有助于我们开发出更好的TAO治疗新策略。
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