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海参内脏多糖是海参内脏的主要活性成分之一,具有多种生理活性,然而在海参加工过程中海参内脏通常被直接丢掉。目前对海参内脏多糖的研究仅局限于简单的生化指标评价,而对海参内脏多糖的结构特征及相关活性机理缺乏系统的研究。本论文以海参内脏为原料,对海参内脏多糖主要组分进行分离纯化、一级结构及高级结构鉴定、体外体内免疫活性进行了系统研究,探讨了海参内脏多糖/溶菌酶纳米复合物作为姜黄素递送载体的应用。主要研究结果如下:(1)海参内脏多糖的分离:通过酶解海参内脏,经过季铵盐沉淀,醇沉等得到海参内脏粗多糖,平均得率为4.90%。采用DEAE-52柱层析分离纯化海参内脏粗多糖并通过活性预筛选获得两种主要多糖组分,并分别命名为SCVP-1和SCVP-2。经过Sephadex G-200进一步分离纯化,得到纯化的SCVP-1和SCVP-2,其纯度分别为92.51%和96.87%,分子量分别为180.8 kDa和209.1 kDa。(2)海参内脏多糖的结构表征:经HPLC分析表明,SCVP-1构成包括了甘露糖、氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸、氨基半乳糖、葡萄糖、半乳糖以及岩藻糖组成,对应的摩尔比为1.00∶1.41∶0.88∶2.14∶1.90∶1.12∶1.24;SCVP-2由氨基葡萄糖、氨基半乳糖、葡萄糖、半乳糖、岩藻糖组成,其摩尔比为1.61∶1.00∶4.79∶1.32∶3.29。通过红外光谱和核磁共振波谱表征,推测出SCVP-1是一种具有硫酸软骨素结构的糖胺聚糖,其主要骨架结构为→4)GlcUAβ(1→3)GalNAcβ(1→,Fuc2,4S和Fuc3,4s通过1→3糖苷键与GlcUA的O-3位相连。SCVP-2是一种岩藻聚糖硫酸酯,主要骨架结构为[→3)Fuc2Sα(1→3)Fuc4Sα(1→3)Fuc0sα(1→]_n。高级结构分析表明,SCVP-1表面呈松散不规则的片状结构,SCVP-2表面呈纤维状网络交错延伸。两种组分均具晶体结构和较好的热稳定性,热分解温度分别为239.54℃和236.11℃。SCVP-1在溶液中呈球形链构象,SCVP-2呈无规线团链构象,两种多糖分子的粒度分布范围较分散,在溶液中存在聚集行为,其有效直径分别为1112.4 nm和1316.0 nm。两种海参内脏多糖均是阴离子多糖。(3)海参内脏多糖体外免疫调节活性评价:SCVP-1可以促进RAW264.7巨噬细胞分泌NO、IL-1β、IL-6及TNF-α并提高巨噬细胞的吞噬作用。TLR4受体是SCVP-1激活巨噬细胞的作用靶点,并通过MAPKs和NF-κB信号转导通路来激活巨噬细胞。SCVP-2则能通过调控MAPKs和NF-κB信号转导通路影响炎症细胞因子的过量释放,从而达到抗炎的效果。(4)海参内脏多糖体内免疫调节活性评价:SCVP-1能显著提高免疫低下小鼠的免疫脏器指数,促进脾淋巴细胞的增殖率,提升小鼠的吞噬能力,有效促进小鼠溶血素抗体的生成,提高血清中细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ的分泌水平,有效缓解迟发型变态反应,提升抗氧化能力。而SCVP-2对免疫低下小鼠的免疫功能及抗氧化能力并无明显改善。(5)海参内脏多糖SCVP-1在营养成分递送系统中的应用:通过带负电的SCVP-1和带正电的溶菌酶Ly以静电作用力自组装构建纳米复合物。对Ly/SCVP-1纳米复合物进行形貌观察及表征,其外形似球形,粒径大小为197.1nm。并对姜黄素Cur进行负载,负载Cur Ly/SCVP-1纳米复合物能显著提升Cur在磷酸盐缓冲液和小鼠血清中的稳定性及抗肿瘤活性。多糖/蛋白质纳米复合体系能够通过负载不稳定的活性成分从而提高其稳定性,在食品及药品领域具有良好的应用前景。