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目的：观察β-葡萄糖苷酶／苦杏仁苷酶解前药系统(β-GLU/AMY)对人膀胱癌EJ细胞生长的影响,初步研究穿膜肽对β-GLU/AMY杀伤人膀胱癌EJ细胞的促进作用,探讨β-GLU/AMY用于膀胱癌治疗的应用前景,为后续构建穿膜肽-酶解前药新型药物传送系统奠定基础。方法：(1)常规培养人膀胱癌EJ细胞,分组后用不同浓度的苦杏仁苷单独或与β-葡萄糖苷酶共同作用于对数生长期的人膀胱癌EJ细胞,用MTT法检测细胞的增殖活性；倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学改变；划痕实验检测细胞迁移能力的变化；流式细胞仪检测细胞凋亡率与凋亡周期。(2)复苏本实验室冻存的高表达穿膜肽(TAT-EGFP融合蛋白)大肠杆菌菌株,在本课题组前期的实验方法上略加改进,大量制备穿膜肽,经纯化后,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定穿膜肽的分子量并切取目的条带做质谱分析；用BCA法测定穿膜肽的浓度；将穿膜肽与人膀胱癌EJ细胞共孵育,荧光显微镜检测穿膜肽的穿膜活性；将穿膜肽与β-GLU/AMY联合应用,采用MTT法检测对人膀胱癌EJ细胞增殖活性的影响。结果：(1)与单纯用苦杏仁苷作用相比,经过β-葡萄糖苷酶激活后人膀胱癌EJ细胞的增殖明显受限,增值抑制率可以达到前者的8.19倍；倒置光学显微镜和透射电镜观察到经过β-葡萄糖苷酶激活苦杏仁苷作用后的人膀胱癌EJ细胞呈现典型凋亡的表现；细胞划痕实验提示经过β-葡萄糖苷酶激活苦杏仁苷作用后的人膀胱癌EJ细胞的迁移能力是下降的；流式细胞仪检测证实经过β-葡萄糖苷酶激活苦杏仁苷作用后的人膀胱癌EJ细胞,其凋亡率增加、多数肿瘤细胞阻滞于S期,这些改变随着苦杏仁苷浓度的增加而明显增强。(2)制备出绿色的可溶性蛋白,纯化后的蛋白样品SDS-PAGE凝胶电泳示分子量为31kd左右,无明显杂带；质谱检测,经比对分析证实为穿膜肽；BCA法测定穿膜肽的浓度为10.25mg/mL;穿膜肽与人膀胱癌EJ细胞共孵育1h后,在荧光显微镜下可见细胞内有绿色荧光；MTT法示穿膜肽与β-GLU/AMY联合应用可以提高其抑制率。结论：(1)低于15mmol/L的苦杏仁苷对人膀胱癌EJ细胞无细胞毒性,但经过β-葡萄糖苷酶激活后,能抑制人膀胱癌EJ细胞的生长和迁移,将人膀胱癌EJ细胞阻滞在S期,促进其凋亡,并且呈剂量依赖性。(2)在前期课题的基础上成功制备出穿膜肽,将穿膜肽与β-GLU/AMY联合应用能提高其对人膀胱癌EJ细胞的抑制率,其具体机制有待进一步研究。(3)研究结果提示,β-GLU/AMY可能成为治疗膀胱癌的有效策略,构建穿膜肽-酶解前药新型药物传送系统是可行的,值得进一步深入研究。