甲状腺相关眼病(thyroid-associated ophthalmopathy，TAO)是最常见的眼眶疾病，也是目前医学上难以治愈的一种疾病。病变累及眶内球后间隙，被认为是一种器官特异性的自身免疫性疾病。在病因方面与自身免疫性甲状腺疾病有着密切的关系，临床上甲状腺机能可以正常、亢进或低下。其发病机制尚不太明确。 大多数TAO患者血液中可检测出促甲状腺激素受体(thyrotropin receptor，TSHR)的抗体，但临床上仍没有明确血清中TSHR抗体(antibody of thyrotropin receptor，TRAb)与TAO严重程度的关系。长期以来对于TAO与Graves病是一种疾病还是密切相关的两种疾病或是两种不同的自身免疫性疾病存在着争论。其争论的核心是Graves病的眼病和甲状腺的表现是否针对单一的抗原引起的自身免疫反应。如果Graves病受累的解剖区域即甲状腺、球后间隙和胫前皮下结缔组织间存在交叉抗原，TSHR将成为最符合逻辑的候选者。为此国内外学者采用各种不同的研究方法在甲状腺外区域寻找TSHR存在的证据，所得的结果不尽相同，而且缺乏全面、系统的研究。由于TAO患者重要表现之一为眼外肌肌腹肿大，进一步发展为纤维化。患者眼球运动障碍，甚至发展成为斜视、复视。因此本研究重点放在眼外肌上。将从TAO患者眼外肌中检测是否存在编码TSHR的mRNA及具有免疫活性的TSHR蛋白，为探明TAO发病机制提供新思路。 第一部分 TSHR在TAO患者眼外肌中基因表达的研究 目的：在转录水平寻找甲状腺外TAO患者球后眼外肌组织中是否存在有编码TSHR的mRNA，证实TSHR作为甲状腺和TAO患者球后眼外肌组织的共同抗原而存在于甲状腺外结构中。 方法：收集TAO患者眼外肌组织标本12例，因暴露性角膜炎或压迫视神经病变行眼眶减压术者6例，因眼球固定引起斜视行斜视矫正术者5例，因暴露性第二军医大学硕士学位论文中文摘要角膜炎，角膜化脓坏死行眼球摘除术者1例。收集正常人眼外肌组织标本10例，分别为健康人意外死亡和斜视手术获得。眼外肌组织液氮速冻，置一80℃冰箱保存。采用异硫氢酸肌一步法提取总RNA，经逆转录一多聚酶链反应(reversetranseription，o]ymerase ehain reaetion，RT一pCR)扩增产物电泳观察TSHR mRNA的表达情况。 结果:12例TAO患者眼外肌组织中有11例发现TSHR mRNA的转录，其阳性检出率为91.67%。10例正常对照组中只有2例眼外肌组织中检测到TSHRmRNA的转录，其阳性检出率为20%。两者具有统计学差异(x夕检验，、2=11.5342，P<0 .005)。 结论:TSHR mRNA在TAO患者球后眼外肌组织中高度表达，提示TSHR可能作为交叉抗原在TAO的发病机制中起重要作用。第二部分TSHR在TAO患者眼外肌中蛋白表达的研究 目的:第一部分实验证实在TAO患者球后眼外肌组织检测到TSHR的转录产物，本部分实验进一步检测TAO患者球后眼外肌组织中是否有TSHR蛋白的表达，以明确上述转录产物是否被翻译成有功能活性和免疫学意义的相关蛋白而发挥生理作用。 方法:由第一部分实验获得的有TSHR n1RNA转录的TAO患者标本11例，正常人标本2例，及无TSHR mRNA转录的TAO患者标本l例，眼外肌组织采用4%中性缓冲甲醛固定，石蜡包埋组织，采用免疫组织化学链霉卵白素一过氧化物酶连接法(streptavidin Peroxidase conjugated method，SP法)进行染色。 结果:TSHR在眼外肌肌束膜、细胞膜及少量胞浆中表达，呈棕黄色颗粒状或块状着色。患者组11例眼外肌组织标本中10例可见TSHR蛋白的表达，阳性检出率为91%。而其他1例TSHR mRNA转录阴性的TAO患者及2例正常对照组眼外肌组织标本中均未见棕黄色染色。 结论:TSHR蛋白在TAO患者眼外肌组织中有表达，而在正常个体没有表达，证实TAO患者球后眼外肌组织中存在有活性的TSHR蛋白，提示TSHR可能作为交叉抗原在TAO发病机制中起重要作用。