草原老鹳草质量标准与有效成分提取工艺研究

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草原老鹳草(Geranium pretense L.)为牻牛儿苗科老鹳草属植物,为传统常用藏药材,藏语音译为拉岗,异名喀图曼巴、辛木头勒曼巴等。草原老鹳草为非正品药材,《中国药典》和《藏药部颁》未收载,收载于《中华本草·藏药卷》,而《藏药志》中已有记载。它主要生长在海拔2600~4000米的灌木草丛、高山草甸、林下或河边草地,分布于四川西北部,西藏东北部和青海东南部。草原老鹳草具有利肺祛风,止泻消炎,解毒排脓的功效,用于肠炎、腹泻、伤寒、音闭、消化不良等症状。本文对草原老鹳草进行了本草考证,并从植物的宏观形态和茎、叶柄、叶的微观组织构造以及粉末特征上对草原老鹳草进行了系统的生药学鉴别,得到草原老鹳草植物叶片,掌状7-9深裂近茎部,裂片菱形或狭菱形;解剖学特征上,草原老鹳草茎的厚壁细胞环带,由11-12层细胞构成,叶柄的厚壁细胞环带,由5-6层细胞构成;粉末特征上,花萼上有大量的毛茸,这些药材性状、解剖学特征和粉末特征是草原老鹳草与其它老鹳草植物的区别所在。本文以莽草酸和没食子酸为对照品对草原老鹳草的TLC鉴别条件进行了优化并对9批样品进行了TLC定性鉴别,得到以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(3:4.5:0.5:1)和环己烷-乙酸乙酯-甲酸(8:6:1)为展开剂,湿度为40%~80%,莽草酸和没食子酸与其它组分很好分离,Rf分别为0.51和0.39,同时测定了药材的水分、总灰分及酸不溶性灰分等理化指标,结果水分9.80%~11.19%,总灰分9.94%~12.23%,酸不溶性灰分1.83%~2.41%。本文以莽草酸和没食子酸为指标成分,建立了HPLC法测定草原老鹳草中莽草酸和没食子酸含量的方法,结果表明此方法简便、快速、准确灵敏,莽草酸和没食子酸的线性回归方程分别为y=42250x+17303, r=0.9995; y=3.5946×106x-21568, r=0.9999;线性范围分别为124.5~1992.0μg,0.064;0.64~0.448μg;平均回收率分别为99.74%,102.96%;RSD分别为1.68%,0.58%,在此条件下,测定了9批自采草原老鹳草样品莽草酸和没食子酸的含量,结果为莽草酸含量为0.16%~0.23%,没食子酸含量为0.18%~0.38%。在上述工作基础上,本文拟定了草原老鹳草质量标准草案,初步拟定草原老鹳草药材按干燥品计算,莽草酸含量不得低于0.15%,没食子酸含量不得低于0.20%;药材水分不得过12.0%,总灰分不得过12.0%,酸不溶性灰分不得过3.0%。本文还以没食子酸为对照品,采用磷钼钨酸-干酪素为显色剂,建立了紫外可见最大吸收波长分光光度法测定川西老鹳草中总鞣质含量的方法,结果表明此方法快速,简便,准确灵敏,没食子酸线性回归方程为y=112.28x+0.0081,r=0.9998,平均回收率为99.29%,RSD为1.22%,运用此方法测定川西老鹳草中鞣质的含量为8.70mg-g-1。此法不仅作为川西老鹳草中鞣质提取工艺评价指标含量的测定方法,同时也为其它药用植物鞣质含量测定提供可借鉴经验和理论依据。本文利用正交实验法,以鞣质提取率为评价指标,对川西老鹳草中鞣质传统的醇提工艺条件进行了优化,得到优选的工艺条件为用8倍量70%乙醇回流提取3次,每次提取1.0h,鞣质提取率为84.95%,浸膏得率为10.20%,浸膏中鞣质的含量为7.23%。本文还探讨了超临界CO2萃取川西老鹳草中鞣质的工艺条件,对影响超临界萃取主要因素进行了考察,同时以鞣质含量为评价指标,分别考察萃取压力、萃取温度、萃取时间和CO2流量对鞣质萃取效果的影响,并通过正交实验得到超临界CO2萃取川西老鹳草中鞣质的较优工艺条件为:乙醇为夹带剂,其用量为与物料质量比为2:1,萃取压力24MP,萃取温度为50℃,CO2流量为25L·h-1条件下,鞣质萃取率达到89.27%,浸膏的得率为3.62%,浸膏中鞣质的含量为21.45%。
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