四环素调控的真核表达系统是生物学研究中的一个重要的工具。四环素可调控表达系统利用大肠杆菌转座子Tn10四环素抗性操纵子构建,其反式激活因子tTA和rtTA由四环素抑制蛋白的DNA结合区与VP16的转录激活区融合形成。利用反式激活因子tTA或rtTA的调控系统分别称为Fet-off系统或Tet-on系统。　　 四环素表达调控系统包含四环素反应元件(Tetracycline-responsive element,TRE)和四环素调控转录激活因子(Tetracycline transcriptional activator,tTA)两部分。TRE和tTA两者可根据需要被重组到病毒或质粒上。目前研究者已成功地将四环素表达调控系统应用到腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、疱疹病毒及昆虫病毒等载体中,并且该表达调控系统已被广泛应用到体外培养的哺乳动物、植物、两栖动物、昆虫等动物的细胞中以及活体组织包括酵母菌、果蝇、植物、小鼠和大鼠中。2000年,Kafri等构建了基于慢病毒载体的Tet-off基因表达调控系统,这种基因表达系统能够有效控制目的基因表达,扩大了慢病毒载体的临床应用潜能,成为很有前景的基因治疗载体。　　 当前大多研究者采用双质粒四环素表达调控系统调控外源基因的表达。然而,双质粒四环素表达调控系统的基因表达调控严格依赖于两个单载体同时感染一个细胞,因而限制其在体内实验中的效率。为了解决这个问题,我们构建了由慢病毒载体构成的单质粒四环素表达调控系统-pLV300(Tet-off)。该系统结合慢病毒的优点,如可感染非分裂细胞,介导的目的基因可整合入宿主细胞,实现靶基因的稳定长期表达以及免疫反应弱等,克服了传统研究中采用双质粒调控系统的操作不便且周期较长的缺陷。实验结果显示,该单质粒四环素调控的慢病毒载体体外可以高效地转移并且维持目的基因的表达,其表达调控效应高效、无毒且具有严密调控功能。该表达调控系统为慢病毒的临床应用奠定了一定基础。　　 此外本实验优化PEI转染技术和磷酸钙转染技术,优化后的磷酸钙转染效率达85％以上,为后期慢病毒的包装奠定了良好的实验基础。