论文部分内容阅读
粉红螺旋聚孢霉(Clonostachys rosea，异名：粉红粘帚霉：Gliocladum rosea)是一种重要的植物寄生线虫天敌真菌，能够寄生线虫的幼虫、卵和雌虫，是研究植物病害生防菌剂的主要研究材料之一。
本文以粉红螺旋聚孢霉高效侵染菌株YMF1.00611为出发菌株，研究毒力因子胞外丝氨酸蛋白酶PrC及其转录调控蛋白PacC在真菌杀线虫过程中所起的作用。
论文的主要研究结果如下：
1.设计兼并引物，用DNA Walking方法克隆得到粉红螺旋聚孢霉(YMF1.00611)的PacC基因，并递交GenBank，序列索引号为：FJ589789。
2.利用Real-time PCR分析了在不同pH条件下和不同线虫接触时间内转录因子PacC的mRNA量的变化，表明PacC分别在pH8时和接触24h时的转录水平最高。
3.构建PacC基因敲除菌株PacC+/-。
4.通过敲除前后菌株的表型观察发现敲除菌株PacC+/-有拟酸性生长趋势。
5.利用Real-time PCR、报告基因质粒转化、凝胶迟滞等技术证实了PacC的存在对胞外丝氨酸蛋白酶PrC的必要性。
6.对敲除前后菌株的生测实验，表明转录因子PacC在粉红螺旋聚孢霉杀线虫过程起正调控作用。
本论文结论主要有以下两点：
1.PrC的正常表达受PacC的调节，而且这一过程很可能发生在转录水平上。
2.PacC在C. rosea侵染线虫过程中起正调节作用。
本论文的创新性主要体现在以下的几个方面：(目前还没有任何食线虫真菌分泌的胞外丝氨酸蛋白酶基因启动子上的pH顺式作用元件及其相关转录因子的信息报道)
1.首次研究食线虫真菌的胞外丝氨酸蛋白酶基因PrC的表达与环境pH及转录因子PacC的关系。
2.首次研究并发现食线虫真菌中的PacC在真菌侵染线虫过程中起正调节作用。