MicroRNAs (miRNAs)是一类在进化上具有保守性的一类基因,其表达具有组织特异性以及时期特异性,并且可以调控生物体的发育过程以及生物体内其它基因的表达。miRNAs在哺乳动物有机体的生长、发育及其细胞分化、增殖、凋亡等生命现象中具有重要并且广泛的调节作用,并且,生物研究领域及与其交叉的学科,已经将niRNAs视为其研究的重点。近些年,随着miRNAs在正常乳腺发育过程及泌乳的调控中的研究陆续增多,将miRNAs在乳腺中的作用的研究也会更加深入。miR-486在不同种细胞中有不同的功能,而且,本实验室已经利用芯片技术分析并且证实了miR-486在不同品质奶牛乳腺中的表达有差异。Pten作为肿瘤抑制因子,在肿瘤中被广泛研究,但在正常乳腺发育过程中的研究却只是冰山一角,尤其其在奶牛乳腺中的研究就更鲜有报道。本研究以miR-486作为研究对象,在targetscan (http://www.targetscan.org)网站上预测的靶基因中选择Pten作为其目标靶基因,研究其如何调节奶牛乳腺发育过程及其泌乳过程。所以,本研究以Pten与miR-486之间的作用作为重点,结果证实,在奶牛乳腺上皮细胞中,Pten确实受到miR-486基因的调控,从而证明miR-486对奶牛乳腺发育过程及其泌乳过程有重要的调控作用。结果显示：1)利用实时荧光定量PCR技术检测各个乳品质奶牛乳腺组织中miR-486的表达量,结果与实验室的芯片结果趋势相同;结合原位杂交技术证实,miR-486在高乳品质奶牛中表达量较高,在低乳品质奶牛及干奶期奶牛中表达量相似；构建Pten序列载体,在HEK-293细胞中进行双荧光素酶活性检测与分析,证实miR-486作用于Pten,预测结果正确。2)将miR-486mimics及mir-486inhibitor分别转染入奶牛乳腺上皮细胞中,结果发现,转染miR-486mimics后,Pten蛋白的表达量降低,细胞内,其下游与泌乳有关的信号分子AKT蛋白、mTOR蛋白以及β-酪蛋白的表达量均升高；然而,转染miR-486inhibitor后,Pten蛋白的表达量升高,细胞内,其下游与泌乳有关的信号分子AKT蛋白、mTOR蛋白以及β-酪蛋白的表达量降低。因此,推测miR-486通过调控Pten基因的表达,进而调控上述与乳腺发育及泌乳密切相关的重要基因的表达。3)在奶牛上皮细胞中过表达miR-486后,利用免疫荧光技术揭示,miR-486的表达可以调控Pten在奶牛乳腺上皮细胞中的位置；利用CCK-8检测细胞活性、Edu技术DNA增殖情况以及利用流式细胞术检测细胞周期,从不同方面证实miR-486促进奶牛乳腺细胞的活性以及增殖能力。在奶牛乳腺上皮细胞中抑制miR-486后,结果则相反。4)分别利用乳糖、乳脂、乳蛋白检测试剂盒检测过表达miR-486后,细胞分泌物中乳糖、乳脂以及乳蛋白的表达量均升高；而抑制miR-486后,细胞分泌物中乳糖、乳脂以及乳蛋白的表达量均有所降低。证实miR-486对乳中的成分具有调节的作用。