北京油鸡体细胞库的构建及GPAT基因克隆

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北京油鸡,以肉味鲜美、蛋质佳良著称,是一个濒危的珍贵地方鸡种。本研究取北京油鸡9-13 日胚,采用组织块贴壁培养法,成功构建了北京油鸡胚胎成纤维样细胞库,细胞冻存密度为3~5×106 细胞/ml。经细胞生物学特性分析发现:细胞生长曲线呈“S”型,表现为潜伏期、对数生长期和水平期三个时期;复苏后细胞活率保持在90%以上;染色体核型分析显示,细胞染色体保持二倍体数目,遗传性稳定;编码谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸酰胺转移酶(Glutamine phosphoribosylpyrophosphate amidotransferase GPAT or PPAT)的GPAT 基因克隆测序及分析表明:所克隆的953bp 片段与Genebank 中已发表编码序列的相似性为100%,进一步证明所培养细胞的遗传性稳定。本研究成功构建了北京油鸡胚胎成纤维样细胞库,对构建该细胞库的方法进行了研究,并对GPAT 基因进行了克隆与分析;旨在用体细胞冷冻保存法保存北京油鸡的遗传资源,同时为研究影响肌肉肌苷酸含量的遗传因素奠定基础。
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