山奈酚抗胃癌及调节树突状细胞功能的实验研究

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背景胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其病死率较高。近几年来,中药抗肿瘤的研究已经成为国内外的研究热点。研究发现,黄酮类化合物能够有效的抑制肿瘤的发生发展,我校中西医结合实验室多年来致力于半枝莲药物的抗肿瘤的研究,发现半枝莲的有效成分能够通过多种机制抑制肿瘤的生长。本研究选取的研究对象为中药单体山奈酚,是半枝莲的活性成分之一。已有报道山奈酚具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡的作用,但山奈酚在胃癌中的研究较少见。目的1、观察山奈酚对胃癌SGC-7901细胞的增殖及凋亡方面的影响,并初步探讨其机制;2、探讨山奈酚对胃癌患者外周血来源的树突状细胞的功能的影响。方法1、MTT法检测山奈酚对SGC-7901细胞的增殖的影响,流式细胞术检测山奈酚对SGC-7901细胞凋亡的影响及其诱导凋亡的机制;酶联免疫吸附实验(ELISA)及细胞免疫荧光实验检测山奈酚对胃癌细胞分泌和表达VEGF的影响;流式细胞术检测山奈酚对SGC-7901细胞表面MHC I类相关抗原(MICA)的表达的影响;2、用淋巴细胞分离液(Ficoll)分离胃癌患者,获得外周血单个核细胞(PBMC),加入GM-CSF、IL-4诱导出树突状细胞(DC);3、流式细胞术检测山奈酚对DC表面HLA-DR分子XD86分子的表达的影响,以及对未成熟DC (iDC)吞噬能力的影响。结果1、山奈酚能够抑制SGC-7901细胞增殖:不同浓度的山奈酚,均能抑制SGC-7901细胞的增殖,与溶媒组比较有显著差异性(P<0.05),且具有剂量、时间依赖性(P<0.05)。2、山奈酚诱导SGC-7901细胞的凋亡:山奈酚60μg/ml、180μg/ml的浓度作用于细胞12h后,细胞凋亡率明显高于溶媒组,具有剂量依赖性(P<0.05)。3、山奈酚增加SGC-7901细胞内活性氧(ROS)的水平:山奈酚(20、40、80μg/ml)作用于细胞12h后,细胞内的ROS水平较溶媒组增加,具有统计意义,有剂量-效应关系(P<0.05)。4、山奈酚抑制SGC-7901细胞VEGF的分泌和表达:ELISA实验显示山奈酚能够剂量依赖性的抑制胃癌细胞VEGF的分泌(P<0.05),细胞免疫荧光实验结果显示细胞内的VEGF的表达水平也随着药物浓度的增加而减低。5、山奈酚下调SGC-7901细胞表面的MICA的表达:与阴性组相比,山奈酚20μg/ml、80μg/ml处理细胞24h后,细胞表面的MICA表达降低,具有显著差异性(P<0.05)。6、山奈酚抑制DC的成熟:山奈酚能够下调DC表面HLA-DR分子和CD86分子的表达,与阴性组相比有统计学意义(P<<0.05),另外,有抑制脂多糖(LPS)刺激DC的成熟的作用(P<0.05)。7、山奈酚处理后的SGC-7901细胞能够增加iDC的吞噬能力:山奈酚作用于细胞12h后,与iDC共培养后,较阴性组比易被iDC吞噬,山奈酚的浓度越高,就越容易被iDC吞噬(P<0.05)。结论1、山奈酚有抑制SGC-7901细胞的增殖,诱导细胞凋亡的作用,凋亡机制可能与增加细胞内ROS的释放水平有关。2、山奈酚能够下调SGC-7901细胞的VEGF表达,抑制SGC-7901细胞表面MICA抗原的表达。3、山奈酚对胃癌患者PBMC诱导来源的DC成熟有抑制作用,但山奈酚处理后的SGC-7901细胞易被未成熟树突状细胞吞噬。
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