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湖北海棠根可治筋骨扭伤,果可入药治胃病并可酿酒,是特色鲜明的食药两用植物,其叶、果实等是土家族常用药物,具有多种药理作用,其嫩叶在湖北、湖南以及少数名族等地晒干作茶饮用已有400多年的历史。由于人类活动的加剧,湖北海棠的生存环境日益恶劣,其数量和种类正在快速减少,本研究为进一步了解湖北海棠叶的药用价值,并找出从湖北海棠叶中提取、分离、纯化其黄酮类物质的最佳工艺条件,为工业化利用湖北海棠提供理论基础,为深度挖掘湖北海棠的经济价值,充分利用湖北海棠中的有效成分,最大限度的保护和开发湖北海棠提供了理论依据。
1.对湖北海棠叶进行基本理化成分的检测,湖北海棠叶含有粗蛋白质含量为10.56%,总糖含量为1.56%,粗脂肪含量为2.4%,灰分含量为5.73%,鲜叶水分含量为55.9%,其主要活性物质总黄酮类物质含量达12.73%。利用高效液相色谱法(HPLC)定性检测湖北海棠叶粗提液,得出其可能含有芦丁或者异牡荆苷;
2.通过考察料液比,乙醇体积分数,超声时间,超声功率对湖北海棠叶总黄酮提取的影响,利用响应面法分析4个因素对湖北海棠叶中总黄酮提取率的影响得出:超声波法提取湖北海棠叶中总黄酮的最佳工艺条件为:液料比50:1(mL/g),乙醇体积分数为67.35%,超声时间为3.2h,超声功率为162.4W,总黄酮提取率预测值为12.78%,验证值为12.76%,与理论值的相对误差为0.02%,表明该优化方法合理可行。
3.利用大孔树脂静态吸附湖北海棠叶粗提物的试验结果显示AB-8平衡较快,且吸附量保持较高的水平,而D101和X-5吸附平衡的时间较长,吸附量也均低于AB-8,可知AB-8对湖北海棠叶黄酮具有良好的吸附解析性能,因此选用AB-8作为吸附材料以进行后续动态吸附试验。动态吸附试验中上样浓度在1-1.4mg/mL的范围内时,黄酮吸附量最大。而吸附流速选为2BV/h时,既保证了湖北海棠叶粗提物中的黄酮物质在合理的时间被有效的吸附,又不会增加额外的能量消耗。当乙醇体积分数为70%时,可获得较大的解析率为93.16%。将通过最佳的动态吸附条件下得到的洗脱液进行浓缩、真空冷冻干燥、粉碎后得到纯化后的湖北海棠叶总黄酮提取物,测定其纯度为51.22%。
4.将抗坏血酸(VC),黄酮粗提液,以及分别经过正丁醇、乙酸乙酯和大孔树脂纯化后的黄酮配成0.01mg/mL~0.6mg/mL的浓度梯度,考察未纯化的黄酮、不同纯化过程的黄酮、抗坏血酸(VC)的抗氧化性能,得出1)在试验浓度范围内,湖北海棠叶还原能力随着黄酮浓度的增加而增大,表明其中的黄酮类化合物起到了还原作用。同时在湖北海棠叶各样液的比较中,还原能力大小顺序为乙酸乙酯萃取部分>大孔树脂纯化黄酮>正丁醇萃取黄酮>粗提液黄酮。2)湖北海棠叶黄酮和VC对邻苯三酚自氧化体系产生的超氧阴离子均有清除作用,随着黄酮浓度的增加,清除率也随之增大,表明湖北海棠叶中的黄酮类物质具有清除超氧阴离子自由基(O2-)的能力。各样液对超氧阴离子的清除能力大小顺序:乙酸乙酯萃取部分>大孔树脂纯化黄酮>抗坏血酸(vC)>正丁醇萃取部分>粗提液黄酮。3)湖北海棠叶总黄酮对DPPH自由基有明显的清除作用,各样液的清除率均高于VC而在同一浓度范围下湖北海棠叶各黄酮样液中,乙酸乙酯萃取黄酮清除率最高,正丁醇萃取部分和大孔树脂纯化部分次之,粗提液黄酮的清除率最低。在相同的浓度范围内,纯化过的黄酮样液抗氧化能力比未纯化的粗提液强,弱极性的黄酮类物质抗氧化能力比极性较大的黄酮类物质强。