论文部分内容阅读
目的研究白血病细胞上B7-H2的表达与异基因造血干细胞移植GVL效应的关系。方法对47例初发的急性白血病患者,应用流式细胞术观察其白血病细胞上B7H2的表达情况,分析其与预后因素的关系。通过流式细胞术及实时定量PCR的方法检测小鼠白血病细胞上B7-H2的表达及其胞内mRNA水平；选用小鼠淋巴瘤细胞株A20作为靶细胞,用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记靶细胞,再用碘化丙碇(PI)标记DNA筛选细胞膜已破坏的靶细胞。效靶比为50：1-10：1,共孵育时间为12小时,流式细胞仪收集1000个靶细胞并测定被杀细胞的百分率。检测其对异基因靶细胞的细胞毒作用的影响。将带有小鼠B7H2基因shRNA片断的质粒载体PGCsi3.0通过脂质体转入高表达B7H2的小鼠淋巴瘤细胞株HBA20。以C57BL/6雄性小鼠为供体,BALB/C雌性小鼠为受体,BALB/C来源的HBA20细胞8×104／只为白血病细胞,同时输注异基因的C57小鼠脾细胞2×106/只,建立小鼠GVL模型,在此基础上输入转有shRNA质粒的小鼠HBA20细胞,观察B7-H2基因沉默后对异基因造血干细胞移植GVL效应的影响。结果B7H2在急性髓细胞白血病(n=29)和急性淋巴细胞白血病(n=19)的阳性率分别为25%和31.42%。低危组与中／高危组差异具有统计学意义(P<0.05)。在效靶比为10：1、20：1、30：1时,阻断肿瘤细胞上的B7-H2,可以明显提高效应细胞对肿瘤细胞的杀伤作用,两组的差别具有统计学意义(P值分别为0.0302、0.0496、0.0152)；随着效靶比例的进一步升高,至40:1、50：1时,阻断肿瘤细胞上的B7-H2不能有效地提高效应细胞对肿瘤细胞的杀伤作用,两组的差别没有统计学意义(P值分别为0.6972、0.4021)。体内实验显示,E组(输转染空白质粒的HBA20细胞及脾细胞)与F组(输转染shRNA质粒的HBA20细胞及脾细胞)差异有统计学意义P=0.0005。结论人类白血病细胞有不同程度的B7H2的表达,其与预后因素相关。体外实验表明,在适当的效、靶比时,封闭白血病细胞上B7-H2,可以有效地提高异基因靶细胞的细胞毒作用。体内实验显示,小鼠淋巴瘤白血病细胞株A20进行B7-H2基因沉默后可以增强异基因造血干细胞移植GVL效应,延长生存时间。