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背景与目的:心肺复苏(Cardiopulmonary resuscitation, CPR)成功的患者后期往往存在不同程度的脑损伤,远期预后仍不容乐观。心肺复苏后的亚低温治疗是改善心脏骤停(cardiac arrest)患者预后的一个重要治疗手段。如冰块、低温毯等均是通过外周神经刺激反射到中枢再反馈到外周降温的,降温速度慢。如果直接作用于体温调节中枢达到更快降温可能更有助于改善复苏疗效。WIN55,212-2作为一种外源性大麻素受体激动剂,有研究表明可通过体温调节中枢直接降温。并有学者在经右心室内膜室颤建立的心脏骤停模型中发现WIN55,212-2能诱导低温,提高心肺复苏的疗效,但其具体机制尚未见报道。因此,本研究拟观察WI]N55,212-2对经食道起搏诱导心脏骤停模型大鼠远期生存及神经功能的影响,同时深入研究WIN55, 212-2对复苏后大鼠脑组织神经元损伤、凋亡的影响,旨在探讨WIN55,212-2药物性低温减轻CA/CPR后大鼠脑损伤的机制,为临床工作提供一条新的思路。方法:第一章:选择健康SD大鼠40只行麻醉、插管后经食道起搏,建立心脏骤停模型。成功诱导后5min行心肺复苏,恢复自主循环的大鼠存活5分钟后,随机分为四组:W组(n=10,WIN55,212-2组)、NT组(n=10,5%DMSO+37℃组)、W+S1组(n=10,WIN55,212-2+CB1受体拮抗剂SR141716A, 5mg/Kg)、W+S2 组(n=10,WIN55,212-2+CB2 受体拮抗剂组SR144528,5mg/Kg)。W+S1组大鼠腹腔注射 CB1拮抗剂 SR141716A,W+S2组大鼠腹腔注射CB2受体拮抗剂SR144528,在自主循环恢复后30分钟,W 组、W+S1组及 W+S2组分别给与 WIN55,212-2 (mg·kg-1·h-1),连续监测大鼠6h的血流动力学和心电,记录各组大鼠的生存时间及复苏后不同时间点(24h、48h、72h)生存率,并在上述时间点进行神经缺失评分(neurological deficit score,NDS)。每组再随机分为复苏后 24、48、72 三个时间点,每个时间点5只大鼠,取出大脑组织,行HE染色法观察病理学改变,末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷原位缺口末端标记法,(Terminal deoxynucleotidy transferase-mediated dUTP nick end labeling ,TUNEL)方法测定神经细胞凋亡,并以western blot法检测其凋亡相关蛋白 casepase3、bax 和 bcl-2。第二章:选择健康SD大鼠30只建立心脏骤停模型。成功诱导后5min行心肺复苏,恢复自主循环的大鼠存活5分钟后,随机分为三组:W组(n=l0,WIN55,212-2组)、NT组(n=10,5%DMSO+37℃组)、W+NT组(n=10,WIN55,212-2+37℃组)。在自主循环恢复后30钟,组、W+NT组分别给与WIN55,212-2 (mg·kg-1·h-1),连续监测大鼠6h的血流动力学和心电,记录各组大鼠的生存时间及复苏后不同时间点(24h、48h、72h)生存率,并进行神经缺失评分(neurological deficit score,NDS)。每组再随机分为复苏后24、48、72三个时间点,每个时间点5只大鼠,取出大脑组织,行HE染色法观察病理学改变,TUNEL方法测定神经细胞凋亡,western blot法检测凋亡相关蛋白casepase3、bax和bcl-2。第三章:选择健康SD大鼠30只建立心脏骤停模型。成功诱导后5min行心肺复苏,恢复自主循环的大鼠存活5分钟后,随机分为三组:W组(n=10,WIN55,212-2 组)、NT 组(n=10,5%DMSO+37℃组)、W+P 组(n=10,WIN55,212-2+ERK受体拮抗剂PD98059组)。W+P组大鼠腹腔注射ERK受体拮抗剂PD98059 (3mg/kg),在自主循环恢复后30分钟,W组、W+P组分别给与WIN55,212-2 (1mg·kg-1·h-1),连续监测大鼠6h的血流动力学和心电,记录各组大鼠的生存时间及复苏后不同时间点(24h、48h、72h)生存率,并行NDS评分。每组再随机分为复苏后24、48、72三个时间点,每个时间点5只大鼠,取出大脑组织,行HE染色法观察病理学改变,TUNEL方法测定神经细胞凋亡,western blot法检测pERK/ERK及凋亡相关蛋白casepase3、bax和bcl-2。结果:第一章:与NT组相比,W组及W+S2组在复苏后可诱导大鼠低温,W组和W+S2组大鼠的72小时的生存率提高,神经系统功能改善(P<0.05)。脑组织病理损伤及凋亡减轻,脑组织的抗凋亡蛋白bcl-2增加,促凋亡蛋白bax及casepase3表达减少。W+S1组大鼠体温未降低,72小时的生存率、神经系统功能、脑组织病理损伤及凋亡未见明显改善,脑组织的抗凋亡蛋白bcl-2未见增加,促凋亡蛋白bax及casepase3未见减少。第二章:与NT组相比,W组在复苏后可诱导大鼠低温,W组大鼠的72小时的生存率提高,神经系统功能改善,脑组织病理损伤及凋亡减轻,脑组织的抗凋亡蛋白bcl-2增加,促凋亡蛋白bax及casepase3表达减少。W+NT组大鼠72小时的生存率、神经系统功能、脑组织病理损伤及凋亡未见改善,脑组织的抗凋亡蛋白bcl-2及促凋亡蛋白bax及casepase3未见明显变化。第三章:与NT组相比,W组在复苏后可诱导大鼠低温,W组大鼠的72小时的生存率提高,神经系统功能改善,脑组织病理损伤及凋亡减轻,脑组织的抗凋亡蛋白bcl-2增加,PERK/ERK蛋白表达量增加,促凋亡蛋白bax及casepase3表达减少。W+P组大鼠72小时的生存率、神经系统功能、脑组织病理损伤及凋亡未见改善,脑组织的PERK/ERK表达量减少,抗凋亡蛋白bcl-2未见增加,促凋亡蛋白bax及casepase3表达增加。结论:(1) WIN55, 212-2主要是通过激活CB1受体诱导低温,提高心肺复苏后大鼠生存率,减轻脑组织的损伤,减少调亡。(2) WIN55, 212-2在大鼠心肺复苏后通过低温效应,改善大鼠的存活、减轻脑损伤、减少凋亡。(3) ERK通路参与了 WIN55, 212-2在心肺复苏后改善大鼠脑损伤作用。