升陷汤干预慢性心衰患者临床疗效及其抗心肌细胞凋亡机制研究

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:AJ0704
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目的:明确升陷汤对慢性心力衰竭伴“大气下陷”患者的临床疗效,并通过动物及细胞实验探索其干预心肌细胞凋亡的可能机制,为中西医结合治疗慢性心力衰竭提供一定依据。方法:临床研究:本研究采用随机对照的研究方法,共纳入78例符合慢性心力衰竭伴“大气下陷”患者。随机分为对照组及治疗组,两组患者在原西药治疗方案的基础上均给予生活方式干预,治疗组加载升陷汤进行干预,治疗2个月。干预前后采集患者一般资料、诊室血压、心率、6分钟步行距离、明尼苏达焦虑评分、中医症状、心脏超声、血清BNP等指标,进行统计分析,评价升陷汤对慢性心力衰竭伴“大气下陷”患者的临床疗效。动物实验研究:以健康雄性SD大鼠为对象,通过尾静脉注射阿霉素制备慢性心衰大鼠模型,随机分为空白对照组、模型组、升陷汤低、中、高剂量组和西药组。分别以纯净饮用水、升陷汤低剂量、升陷汤中剂量、升陷汤高剂量、卡托普利灌胃,治疗28天后检测心率、心超、血流动力学、心脏重量、血清BNP水平、心肌细胞凋亡指数、心肌结构,并围绕TREM-1及NF-κB/Survivin/Casapse3通路,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测基因表达,免疫印迹(Western Blot)检测蛋白表达,进行统计分析。细胞实验研究:以H9c2心肌细胞为对象,构建阿霉素诱导的心肌细胞损伤模型,检测TREM-1及NF-κB/Survivin/Casapse3相关分子的表达,同时对大鼠TREM1基因的shRNA和过表达质粒转染,并以升陷汤预处理过表达TREM-1基因的H9c2心肌细胞损伤模型,检测TREM-1及NF-κB/Survivin/Casapse3相关分子的表达,进行数据统计分析。结果:临床研究(1)对血压、心率的影响:两组患者治疗前收缩压(F=0.788,P=0.377),心率(F=1.358,P=0.248),具有组间均质性。治疗后,治疗组患者收缩压高于对照组(F=8.968,P=0.004),心率低于对照组(F=11.606,P=0.012)。提示升陷汤对心衰患者收缩压、心率具有调节作用。(2)对BNP的影响:治疗后BNP水平治疗组低于对照组(Z=-3.324,P<0.001),BNP治疗有效率,治疗组为69.2%,高于对照组的41.0%(Z=2.488,P=0.013),提示加载升陷汤治疗组对BNP改善具有一定改善作用。(3)对左室射血分数的影响:治疗前两组患者左室射血分数(LVEF)(t=1.978,P=0.052)差别无统计学差异,具有可比性,治疗后,治疗组患者LVEF较治疗前升高(t=2.425,P=0.020)。提示加载升陷汤对患者LVEF有提升作用。(4)对6分钟步行距离的影响:治疗前,两组患者6分钟步行距离(F=0.421,P=0.518)差别无统计学意义,治疗后治疗组6分组步行距离优于对照组(F=6.234,P=0.015),治疗组有效率及显效率均高于对照组(Z=-3.299,P=0.001)提示加载升陷汤治疗对心衰患者6分钟步行距离具有一定改善作用。(5)对生活质量评分的影响:治疗前两组患者明尼苏达生活质量评分(F=0.235,P=0.629),差别无统计学意义。治疗后,治疗组(F=16.234、P<0.001)、对照组(F=6.943,P=0.012)评分均有改善。(6)对心功能分级的影响:两组患者心功能分级疗效比较,治疗组显效率及有效率高于对照组(Z=-2.320,P=0.02),提示升陷汤对患者心功能有改善的效果。(7)对中医症候的影响:两组患者中医症状疗效比较,治疗组显效率及有效率均优于对照组(Z=-2.280,P=0.023),提示加载升陷汤可以改善患者相关中医症状。动物实验研究(1)对大鼠心超的影响:模型组左室舒、缩末径高于对照组,EF低于对照组(P<0.01);各用药组左室舒、缩末径低于模型组,EF高于模型组(P<0.01);升陷汤高剂量组左室舒、缩末径、EF与ACEI组相当(P>0.05),差别无统计学意义;升陷汤对左室舒、缩末径及EF的改善程度与升陷汤剂量相关(P<0.01)。提示升陷汤具有改善慢性心衰大鼠左室射血分数的作用。(2)对血流动力学的影响:模型组左室收缩末压力、左室内最大上升速率及下降速率低于对照组,左室舒张末压力高于对照组(P<0.01);各用药组左室收缩末压力、左室内最大上升速率及下降速率高于模型组,左室舒张末压力低于模型组(P<0.01);升陷汤高剂量组左室舒、缩末压力与ACEI组相当(P>0.05),差别无统计学意义;升陷汤对血流动力学的改善程度与升陷汤剂量相关(P<0.01)。提示升陷汤具有改善慢性心衰大鼠血流动力学的作用。(3)对心率、心脏重量的影响:模型组心率及心脏重量低于对照组(P<0.01);各用药组心率均高于模型组(P<0.01);升陷汤高剂量组与ACEI组心率差异无统计学意义(P=0.499);升陷汤各剂量组间比较,心率随升陷汤浓度升高而升高,差别具有统计学意义(P<0.01)。(4)对BNP水平影响:模型组高于对照组(P<0.01);各用药组低于模型组(P<0.01);升陷汤低、中剂量组高于ACEI组(P<0.01);升陷汤高剂量组与ACEI组差别无统计学意义(P=0.915);BNP水平随升陷汤浓度升高而降低(P<0.01)。提示升陷汤具有改善慢性心衰大鼠BNP水平的作用。(5)对心肌细胞凋亡率的影响:模型组高于对照组(P<0.01),各用药组低于模型组(P<0.01),升陷汤高剂量组与ACEI组相近,差别无统计学意义(P=0.557),升陷汤不同剂量组凋亡率随升陷汤浓度升高而降低(P<0.01)。提示升陷汤具有改善心肌细胞凋亡的作用。(6)对TREM-1及NF-κB/Survivin/Casapse3通路相关蛋白的影响:模型组TREM-1、Casapse-3及细胞核内NF-κB蛋白表达高于对照组(P<0.01),Survivin及NF-κB低于对照组(P<0.01),各用药组TREM-1、Casapse-3及细胞核内NF-κB蛋白表达低于模型组(P<0.01),Survivin及NF-κB高于模型组(P<0.01),升陷汤高剂量组中Casapse-3及细胞核内NF-κB蛋白表达与ACEI组相近(P>0.05),各蛋白表达随升陷汤浓度变化而变化(P<0.01)。提示升陷汤可以抑制慢性心衰大鼠TREM-1、Casapse-3、细胞核内NF-κB,升高NF-κB、Survivin蛋白及相关mRNA表达。细胞实验研究:(1)升陷汤对阿霉素诱导的H9c2细胞的干预作用:升陷汤可以抑制阿霉素诱导的H9c2心肌细胞凋亡,抑制TREM-1、Casapse-3及细胞核内NF-κB,升高NF-κB、Survivin蛋白的表达(P<0.01)。(2)TREM-1 对NF-κB/Survivin/Casapse3通路的影响:阿霉素处理的H9c2细胞中,TREM-1 基因沉默后,NF-κB、Survivin升高(P<0.01),Casapse-3、细胞核内NF-κB降低(P<0.01)。提示阿霉素可能通过TREM-1调节NF-κB/Survivin/Casapse3通路,导致Casapse-3升高,最终引起心肌细胞凋亡。(3)升陷汤对TREM-1及NF-KB/Survivin/Casapse3通路相关蛋白的影响:升陷汤干预阿霉素处理的TREM-1过表达H9c2细胞,升陷汤组TREM-1、Caspase-3、细胞核内NF-κB表达较模型降低(P<0.01),NF-κB及Survivin(P<0.01)表达较模型组升高。提示升陷汤可能通过TREM-1调节NF-κB/Survivin/Casapse3通路,起到抗心肌细胞凋亡的作用。结论:(1)应用升陷汤治疗可以提升慢性心力衰竭伴“大气下陷”患者的左室射血分数、6分钟步行距离,降低血清BNP水平,改善心功能,提高生活质量,缓解中医临床症状。(2)升陷汤可以改善慢性心衰大鼠心超、血流动力学指标,降低循环中BNP含量,改善心肌细胞凋亡及相关蛋白的表达。(3)升陷汤通过抑制TREM-1调节NF-κB/Survivin/Casapse3通路相关因子表达,从而抑制心肌细胞凋亡,改善慢性心力衰竭。
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