MGMT启动子甲基化与前列腺癌化疗敏感性的关系

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目的:研究MGMT基因在前列腺癌细胞系LNCap和DU145中的启动子的甲基化情况,及其与前列腺癌化疗敏感性的关系。  研究方法:选取2种前列腺癌细胞系LNCap和DU145和常用化疗药物紫杉醇和顺铂。应用Illumina Human甲基化450K芯片,检测紫杉醇处理48小时前后前列腺癌细胞全基因组基因启动子甲基化情况。应用PCR和western blot方法检测两种前列腺癌细胞系中MGMT基因表达水平和蛋白表达水平。应用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测两种前列腺癌细胞系LNCap和DU145中MGMT启动子的甲基化情况。应用western blot检测去甲基化药物地西他滨(DAC)处理前后,前列腺癌细胞中MGMT的蛋白表达。应用CCK8分析在前列腺癌细胞中MGMT启动子甲基化对顺铂和紫杉醇的化疗敏感性的影响。  结果:在2种前列腺癌细胞的比较中,MGMT基因启动子甲基化在DU145中较LNCap更高。LNCap细胞中的MGMT基因表达和蛋白表达均高于DU145细胞。两种前列腺癌细胞在紫杉醇处理前后,MGMT启动子甲基化没有明显改变。地西他滨作用两种前列腺癌细胞系,MGMT基因启动子甲基化有明显的去甲基化改变。同时,地西他宾可以使前列腺癌细胞中MGMT的表达发生改变。DAC处理前列腺癌细胞后,可以使顺铂和紫杉醇的化疗效果发生改变。  结论:本研究揭示了DAC可以降低前列腺癌细胞中MGMT基因启动子甲基化水平,并可以增加MGMT的蛋白表达。紫杉醇对前列腺癌细胞中MGMT启动子甲基化情况没有影响。本研究创新点在于通过甲基化芯片技术检测了紫杉醇对前列腺癌细胞的基因甲基化的影响,DU145细胞中有82个差异甲基化位点,其中高甲基化位点39个,低甲基化位点43个;LNCap细胞中有338个差异甲基化位点,其中高甲基化位点299个,低甲基化位点39个,为未来探索提高紫杉醇对前列腺癌的化疗效果提供了研究方向。而且本实验证明了DAC可以提高前列腺癌对紫杉醇和顺铂的化疗敏感性,并且对紫杉醇的效果更明显。
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