【摘 要】
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野生稻与栽培稻同属稻属,但由于野生稻长期处于野生状态下,经受了不良环境的选择,因此,具有许多优良的遗传性状,是栽培稻育种改良,拓宽栽培稻遗传基础的良好材料。云南是亚洲稻种起
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野生稻与栽培稻同属稻属,但由于野生稻长期处于野生状态下,经受了不良环境的选择,因此,具有许多优良的遗传性状,是栽培稻育种改良,拓宽栽培稻遗传基础的良好材料。云南是亚洲稻种起源中心及多样性分布中心之一,三种野生稻都具有不同程度差异的多种生态类型。元江普通野生稻被认为最原始、最典型的普通野生稻类型之一,对研究亚洲栽培稻的起源进化过程具有重要的意义。目前由于人为因素的影响导致野生稻资源的严重破坏,采取构建cDNA文库方法,不仅是对其遗传资源进行了保护,而且为进一步发掘和研究其功能基因的有效手段。
本实验选取生长6-7叶期的元江普通野生稻叶片为材料,采用Clontech公司的SMARTTM技术构建以λTriplEx2为载体的全长cDNA文库。该文库质量分析结果:原始文库的滴度为1.70×106pfu/ml;扩增文库的滴度为3.98×107pfu/ml,重组率为91%。随机挑取534个噬菌斑,利用菌BM25.8产生的Cre重组酶将所建文库转化为质粒型pTriplEx2载体,选择了194个转化结果好的菌样进行测序,获得115个序列,分别采用Blast、ORFfinder、UniGene和EntrezGene系统等生物信息分析软件对这些序列进行分析,结果为:与栽培稻(Oryzasativa(japonicacultivar-group))序列比较匹配碱基数>400bp的占48.45%;确定可阅读框(>100bp,具有起始和终止密码子)的占70%;与拟南芥的功能基因比较,相似性大于60%的有38个;确定功能、代谢过程和编码蛋白部位的cDNA片段分别有17个、16个和24个。这为今后从云南野生稻中确定或分离新的功能基因奠定一定的实验基础。
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