【摘 要】
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本研究的主要目的是表达足量的可溶性促衰变因子(DAF)蛋白用于动物试验,测定DAF在血清中的代谢规律和对补体系统的抑制效果。在本研究中,充分采用了如PCR、载体构建、转化、
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本研究的主要目的是表达足量的可溶性促衰变因子(DAF)蛋白用于动物试验,测定DAF在血清中的代谢规律和对补体系统的抑制效果。在本研究中,充分采用了如PCR、载体构建、转化、蛋白诱导表达和液相色谱等技术得到了高度纯化的蛋白质。进而采用单克隆抗体技术,制备了20株抗-大鼠DAF(rDAF)的单克隆抗体,建立了检测可溶性rDAF的ELISA系统(最低浓度下限可达10 ng/ml)和Western blot用单抗株(可检出40 ng rDAF蛋白)。通过大鼠的在体试验证明rDAF在大鼠体内代谢非常快且对大鼠血浆补体抑制程度很小,其本身并不适合作为一种补体抑制剂使用。除此以外,还完成了以下两个工作:建立了新的高效折叠复性DAF蛋白的方案;探索了可溶性表达DAF的可能性并揭示了NusA-DAF融合蛋白形成可溶性包涵体的原因。
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