【摘 要】
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近年来,马立克氏病对家禽养殖业造成了严重的危害,其病原体不断变异,导致疫苗免疫效力降低以及免疫失败的现象越来越多。因此,提高疫苗的免疫效力变得尤为重要。而防御素具有多种生物活性,并作为效应分子参与机体的适应性免疫反应,具有免疫调节作用。故本研究将鸡β-防御素-5（AvBD5）基因与真核表达载体pcDNA3.1（+）连接,构建重组表达质粒,并作为免疫佐剂与HVT冻干苗联合免疫雏鸡,探究其是否具有免疫
【基金项目】
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山西省重点研发计划（201703D221024-5,201703D211001）；
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近年来,马立克氏病对家禽养殖业造成了严重的危害,其病原体不断变异,导致疫苗免疫效力降低以及免疫失败的现象越来越多。因此,提高疫苗的免疫效力变得尤为重要。而防御素具有多种生物活性,并作为效应分子参与机体的适应性免疫反应,具有免疫调节作用。故本研究将鸡β-防御素-5（AvBD5）基因与真核表达载体pcDNA3.1（+）连接,构建重组表达质粒,并作为免疫佐剂与HVT冻干苗联合免疫雏鸡,探究其是否具有免疫增效功能。主要内容如下:1.重组真核表达质粒pcDNA3.1（+）-AvBD5的构建按照NCBI中鸡的AvBD5 cDNA序列（AY621307）设计引物,并添加相应的限制性酶切位点Hind III和Kpn I。依据设计的引物对AvBD5基因进行PCR扩增,将扩增得到的基因先与克隆载体连接进行复制,提取质粒后经酶切再与真核表达载体pcDNA3.1（+）进行连接和转化,摇菌后进行菌液PCR以及双酶切鉴定,将鉴定正确的质粒送公司进行测序。结果显示:AvBD5基因同源性达到100%,序列正确,证明成功构建出重组表达质粒pcDNA3.1（+）-AvBD5。2.重组表达质粒pcDNA3.1（+）-AvBD5免疫增强效果的研究大量提取重组表达质粒pcDNA3.1（+）-AvBD5,制备分子佐剂。将1日龄雏鸡随机分为8组,每组30只,分别注射PBS、空质粒pcDNA3.1（+）、分子佐剂、CVI988疫苗、HVT冻干苗以及分子佐剂联合HVT冻干苗。处理完成后,在第7、14、21、28、35日龄,每组随机选取5只鸡,称重,无菌采血,取出脾脏、胸腺、法氏囊并称重,计算出每只鸡的免疫器官指数。将采集的抗凝血进行处理,通过流式细胞仪检测CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞的数量。血液分离出血清后,通过ELISA方法检测血清Ig G抗体和MD抗体的含量。结果显示:分子佐剂可以促进脾脏和法氏囊的生长,并显著增加外周血中CD3+、CD4+T淋巴细胞的数量。与HVT冻干苗联合免疫后,可以显著增加血清中Ig G抗体的含量以及MD抗体的水平,这表明分子佐剂具有一定的免疫增强能力,并且可以提高HVT冻干苗的免疫效力。
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