TSA对绵羊卵母细胞体外培养的影响

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本研究通过探讨Trichostation A对绵羊卵母细胞体外成熟、体外受精、胚胎后期发育及Trichostation A对经Brilliant cresyl blue染色液筛选后对BCB+卵母细胞、BCB-卵母细胞后期发育的影响,为进一步研究胚胎发育过程中表观遗传调控机制和胚胎发育机理提供理论依据。主要研究结果如下:1. TSA对绵羊卵母细胞及孤雌胚胎发育的影响在胚胎培养液中分别添加0、50、100、200、300、500nM TSA,发现胚胎培养液中添加300nM TSA能显著提高绵羊孤雌胚胎的囊胚率及囊胚细胞总数(P<0.05);TSA分别作用0h、5h、15h,发现胚胎培养液中添加300nM TSA处理10h能显著提高绵羊孤雌胚胎的囊胚率(P<0.05);与体外胚胎培养液阶段添加TSA相比,在体外成熟液阶段添加300nM TSA作用10h可降低卵母细胞体外成熟率及孤雌胚胎的后期发育能力。因此,在体外胚胎培养液中添加300nM TSA,作用10h,能显著提高绵羊卵母细胞孤雌胚胎的发育能力。2. TSA对绵羊卵母细胞体外成熟及体外受精的影响在卵母细胞体外成熟液中添加不同浓度TSA(0、50、100、200nM),对绵羊卵母细胞颗粒细胞的扩展产生抑制作用,当体外成熟液中添加的TSA浓度达到200nM时显著抑制了卵母细胞的成熟及体外受精胚胎后期的发育能力;体外受精液中添加不同浓度TSA(0、100、200、300nM),发现体外受精液中添加200nM TSA能显著提高绵羊卵母细胞体外受精胚胎的囊胚率及囊胚细胞总数(P<0.05);体外受精液中添加200nM TSA处理不同时间(0h、10h、24h)后,结果处理10h能显著提高受精胚胎的囊胚率(P<0.05);因此,在成熟液中添加TSA对卵母细胞的成熟及后期发育无显著作用,浓度增加到200nM,显著抑制卵母细胞成熟及后期发育能力,而在体外受精液中添加200nM TSA作用10h则能显著提高受精胚胎的发育能力。3. TSA对经BCB筛选后卵母细胞体外胚胎发育的影响将绵羊卵母细胞置于26uM BCB染色液中染色90min后,卵母细胞胞质着蓝色为BCB+,胞质没有着色的为BCB-。分别将BCB+和BCB-卵母细胞进行孤雌激活和体外受精,结果表明:孤雌激活中,BCB+卵母细胞囊胚率显著高于对照组和BCB-组(P<0.05),BCB-卵母细胞卵裂率和囊胚细胞总数显著低于BCB+组。在体外受精中,BCB+卵母细胞囊胚率和囊胚细胞总数均显著高于对照组和BCB-(P<0.05),BCB-组卵母细胞的囊胚率(16.89%vs37.55%)和囊胚细胞总数(79.45vs100.29)显著低于对照组(P<0.05);将BCB-卵母细胞孤雌胚胎和受精胚胎分别置于300nM TSA胚胎培养液中作用10h显著提高了BCB-卵母细胞孤雌胚胎囊胚率(23.33%vs35.65%)和受精胚胎囊胚率(19.36%vs29.46%)(P<0.05);将BCB+卵母细胞孤雌胚胎和受精胚胎分别置于300nM TSA胚胎培养液中作用10h不能提高BCB+卵母细胞的体外发育能力(P>0.05)。
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