慢性疼痛是困扰人类日常生活的最常见问题,对于疼痛的患者来说,慢性疼痛不仅仅是一种痛苦的体验,还会带来孤独感和绝望感,因此慢性疼痛作为一种疾病及早治疗,有效地控制并改善生活质量是临床慢性疼痛治疗的最终目标。慢性疼痛包括骨关节痛、腰背痛以及神经病理性疼痛等。事实上无论是在发展中国家或是在发达国家,慢性疼痛发病率都相当高。众所周知,在慢性肾衰(CRF)患者中慢性疼痛是其常见症状之一；肌肉、骨骼系统疾患引起的慢性疼痛是特别突出的问题,而患有肌肉、骨骼系统疾病的患者往往合并肾脏的损害,这就给临床治疗带来许多的问题；临床上对于并发慢性肾功能不全的患者更易发生药物不良反应及药物相互之间的作用。慢性疼痛一般以药物治疗为主,主要镇痛药物有乙酰氨基酚、非甾体抗炎药(NSAIDs)和阿片类药物。NSAIDs具有抗炎作用和中等程度的镇痛作用,对关节痛、肌肉痛和神经痛等慢性疼痛有较好的镇痛效果,对炎症性疼痛疗效更好,长期应用无耐受性和成瘾性,因此,NSAIDs作为慢性疼痛的镇痛药物主体是合理的。虽然在过去的许多临床研究和药品上市后对NSAIDs的疗效和毒性进行了广泛的评估,但目前对于这些不良反应的严重性和发生率仍然缺乏足够的定量数据。在所有的不良反应中,对于肾功能损害这种严重不良反应我们更加应该给予足够的关注。常用的NSAIDs物往往禁用或慎用于慢性肾功能不全患者；因NSAIDs有抑制前列腺素合成作用,会减少肾脏血流量,尤其老年人的肾脏随着年龄增长其功能也相应减退,故老年人长期服用NSAIDs要慎重。试图为CRF患者提供安全的止痛药物是临床疼痛治疗中的越来越迫切需要解决的问题之一。帕歌斯是一种生长于非洲沙漠和草原的被称作“魔鬼爪”(Devil’S Claw)植物的根提取物的药物,魔鬼爪在20世纪初由非洲引入欧洲,被《英国植物药典》收载,作为抗风湿植物药广泛应用。近40年欧洲对该药进行了较深入的基础和临床研究。基础研究证实帕歌斯具有抗风湿、镇痛、抗炎作用。在临床上国内外多项对照研究表明帕歌斯在治疗骨关节疾病中的镇痛效果显着。帕歌斯起效时间2～3天,消肿止痛等消炎作用较快,与NSAIDs相似。对血沉(ESR)、C-反应蛋白(CRP)及类风湿因子(RF)无改变。相关报道表明与NSAIDs抑制环氧化酶的作用机制不同帕歌斯还具有具有利尿、排石和降低尿酸的作用。而关于帕歌斯在对肾脏疾患尤其是肾功能衰竭进行镇痛方面的肾保护作用及其机制的动物实验尚缺乏研究。为了探讨帕歌斯肾保护作用及其机制,我们建立了腺嘌呤诱导的大鼠CRF这一经典模型。选择已知对肾功能有损害作用的药物双氯酚酸作为阳性对照药物,使用帕歌斯的不同剂量组同时用于慢性肾功能衰竭大鼠,探讨帕歌斯对大鼠肾功能的影响。本文分二部分阐述如下。第一部分慢性肾功能衰竭动物模型的建立目的：为CRF患者提供安全的止痛药物是临床疼痛治疗中的常见问题。因此提供与临床相关性好的CRF动物模型,对研究其发病机理,探讨肾脏组织形态学变化,了解生化指标,评估治疗药物疗效和副作用均具重要意义。方法：SD雄性大鼠52只,适应性喂养1周后,分别逐个称重,随机分为正常组14只,造模组38只。正常组每日给予等量生理盐水(5ml／只／日)灌胃，造模组每日灌服腺嘌呤。腺嘌呤以生理盐水配成25%浓度混悬液,按250mg/kg/d给予,造模连续用药21天。造模过程中大鼠自由进食、饮水。随饲养天数的增加,大鼠每日逐个称重,并记录大鼠体重。造模后第22天,用代谢笼收集24h尿,测24h尿量、24h尿蛋定量。以2%戊巴比妥钠40mg/kg麻醉、处死,心脏穿刺取血,1500rpm离心5min分离血浆,尿和血清置-70℃保存以备测BUN、Scr、Hb、Ca、P等指标。取右肾放入10%福尔马林中固定,脱水、浸蜡、包埋、切片,供HE染色和Masson染色,光镜下观察病理改变。结果：所有大鼠的标本收集均在第22天完成。造模期间模型组大鼠进食量减少,体重下降,精神萎靡,体毛干枯不齐。正常组大鼠饮食如常,体重增加,反应灵敏,体毛顺滑有光泽。造模21天后模型组与正常组比较均显示肾重／体重升高,24h尿量、24h尿蛋白定量、BUN、Scr明显升高,Hb降低,差异均有统计学意义(p<0.05)。造模过程中大鼠无死亡。结论：成功建造慢性肾功能衰竭大鼠模型。第二部分帕歌斯对慢性肾衰大鼠肾脏的影响目的：帕歌斯具有抗炎、抗风湿、镇痛作用。目前多用于骨关节炎、风湿性疾病及慢性疼痛治疗,可用于肝脏肾脏代谢紊乱的患者。与NSAIDs相比,无明显胃肠、心肾副作用。本部分实验应用帕歌斯对大鼠CRF模型进行动物实验,以探讨帕歌斯肾保护作用及其可能的机制方法：取造模组成功造模后的32只大鼠随机分为模型组、帕歌斯低剂量组、帕歌斯高剂量组、双氯芬酸组,每组各8只。治疗以帕歌斯低剂量组为临床等效组(按成人每公斤体重用量的6倍折算),以302.4mg/(kg·d)灌胃；高剂量组(低剂量组的3倍),按907.2mg/(kg·d)灌胃。双氯芬酸作为阳性对照组用生理盐水配成20%溶液,按5.25mg/(kg·d)灌胃。正常组和模型组给予等量生理盐水,共治疗30天。治疗过程中大鼠自由进食、饮水。治疗后第31天,用代谢笼收集24h尿,测24h尿量、24h尿蛋定量。以2%戊巴比妥钠40mg/kg麻醉、处死,心脏穿刺取血,1500rpm离心5min分离血浆,尿和血清置-70℃保存测BUN、Scr、Hb、Ca、P等指标。取右肾放入10%福尔马林中固定,脱水、浸蜡、包埋、切片,供HE染色和Masson染色,光镜下观察各组病理改变。SABC法检测TGF-β1在肾组织中的表达。结果：所有大鼠的标本收集均在第31天完成,治疗用药过程中阳性对照双氯芬酸组2只大鼠死亡。治疗过程中模型组大鼠进食量减少,体重下降,精神萎靡,体毛干枯不齐。正常组大鼠饮食如常,体重增加,反应灵敏,体毛顺滑有光泽。帕歌斯高、低剂量组的24h尿量、24h尿蛋白定量、肾重／体重、BUN、Scr、Hb、电解质分别与模型组比较,两组之间无显着差异(p>0.05),帕歌斯高、低剂量组组间比较也无显着差异(p>0.05)；双氯芬酸组的上述数值分别与模型组及帕歌斯高、低组比较均有显着性差异。本研究中肾脏常规病理及Masson染色结果表明帕歌斯低、高剂量组肾脏改变及纤维化组织增生程度均较轻,双氯芬酸组损伤最重。本实验免疫组化显示TGF-β1在帕歌斯高、低剂量组表达较少,在双氯芬酸组表达较多。帕歌斯没有进一步加重CRF大鼠肾小管-间质损害,提示与双氯芬酸相比较帕歌斯是一种安全、无肾毒性的药物。结论：本实验研究表明给CRF大鼠分别灌服低、高剂量帕歌斯30天后肾重／体重、肾功能未进一步恶化,贫血及电解质紊乱亦未见进一步加重。但是CRF大鼠灌服双氯芬酸过程中,先后有2只大鼠死亡,灌服30天后,肾功能、贫血及电解质紊乱进一步加重。肾脏常规病理及Masson染色结果表明帕歌斯低、高剂量组对肾脏改变及纤维化组织增生程度均较轻。TGF-β1在帕歌斯高、低剂量组表达较少,帕歌斯可能通过抑制其在肾组织的表达,减少其过度积聚,延缓肾间质纤维化。帕歌斯对腺嘌呤所致CRF的保护机制可能与减少TGF-β1在肾组织中的表达有关。总结本文我们使用腺嘌呤诱导建立了大鼠CRF这一经典模型。并运用大鼠CRF模型研究帕歌斯对CRF大鼠肾脏的影响,结果表明CRF大鼠分别灌服低、高剂量帕歌斯30天后肾重／体重、肾功能未进一步恶化,贫血及电解质紊乱亦未见进一步加重。肾脏常规病理及Masson染色结果表明帕歌斯低、高剂量组对肾脏改变及纤维化组织增生程度均较轻。本实验免疫组化显示TGF-β1在帕歌斯高、低剂量组表达较少,在双氯芬酸组表达较多。帕歌斯可能通过抑制其在肾组织的表达,减少其过度积聚,延缓肾间质纤维化。帕歌斯对腺嘌呤所致CRF的保护机制可能与减少TGF-β1在肾组织中的表达有关。目前NSAIDs物往往禁用或慎用于慢性肾功能不全患者；因此为CRF患者提供安全的止痛药物是临床疼痛治疗中的常见问题。而帕歌斯为临床的CRF患者的疼痛治疗提供了一种安全用药选择。