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研究背景:胆道并发症是目前肝移植术后导致移植肝功能丧失的最主要原因,其中以缺血型胆道病变（ischemic-type biliary lesion,ITBL）最为棘手,被认为是肝移植的“阿基里斯之踵”[1]。以往的临床实践及研究认为ITBL是多种损伤因素综合作用的结果[2,3],但与肝移植过程中缺血再灌注损伤、胆盐的细胞毒性损伤及免疫相关性损伤关系最为紧密[4],但其确切病因及发病机制仍不清楚,致使对ITBL的防治手段非常有限[5]。Forkhead-box A1/A2（Foxa1/Foxa2）基因也称为Hepatocyte Nuclear Factor-3α/β（HNF3α/β）基因,是转录因子家族—FOX家族中的重要成员,在人体许多组织中表达,如乳腺、肺、前列腺、食管、胰腺、膀胱等。FOXA1和FOXA2在肝组织中也有表达,研究表明FOXA1和FOXA2是肝脏器官发生、发育及维持正常生理功能（尤其是胆汁分泌功能）重要的转录调控因子[6,7]。在大量的肝移植后穿刺组织的临床病理观察研究中发现,ITBL病例中往往出现FOXA1和FOXA2在胆管上皮细胞（biliary epithelial cell;BEC）的表达下降,提示FOXA1和FOXA2可能与肝移植后ITBL的发生相关,可能参与了肝移植后ITBL的发生过程,但有关FOXA1和FOXA2与肝移植后ITBL的关系国内尚未见研究报道。为探索FOXA1和FOXA2与肝移植后ITBL的相关性及FOXA1和FOXA2在ITBL发生过程中的作用及可能的作用机制,本课题首先利用肝移植后肝组织石蜡包埋标本,应用免疫组织化学染色方法,观察FOXA1和FOXA2在肝移植后ITBL肝组织中的定位和表达情况,并结合临床资料,分析FOXA1和FOXA2阳性表达与ITBL严重程度分级之间的关系。其次,利用体外细胞实验,模拟肝移植后主要的胆道损伤因素,分析FOXA1和FOXA2在胆管上皮细胞表达的影响因素,探讨FOXA1/FOXA2在ITBL发生过程中的作用及可能作用机制。研究目的:分析FOXA1/FOXA2表达与ITBL之间的相关性;分析FOXA1/FOXA2阳性表达与ITBL严重程度分级之间的相关性;分析影响FOXA1/FOXA2在肝内胆管上皮细胞表达的影响因素;探讨FOXA1/FOXA2在肝移植后ITBL发生过程中的可能作用机制。研究方法:本课题利用石蜡组织标本,应用免疫组化法检测FOXA1/FOXA2蛋白在肝组织中的定位及表达情况,分析FOXA1/FOXA2的表达与ITBL的相关性;结合临床资料,分析FOXA1/FOXA2的表达与ITBL严重程度分级之间的关系;通过体外细胞实验,利用Western-blot、Real-Time PCR等实验方法,分析胆管上皮细胞内FOXA1/FOXA2表达的影响因素,探讨FOXA1/FOXA2在肝移植后ITBL发生过程中的作用及可能作用机制。研究结果:1、免疫组化结果显示,FOXA1和FOXA2在ITBL组及非ITBL组肝细胞和胆管上皮细胞中都有阳性表达,表达位置在肝细胞和胆管上皮细胞的细胞核;FOXA1和FOXA2在ITBL组胆管上皮细胞的表达均明显低于非ITBL组,差异有统计学意义（p<0.05）。2、FOXA1在ITBL肝内胆管上皮细胞的表达与ITBL严重程度无明显相关性（p=0.093）;FOXA2在ITBL肝内胆管上皮细胞的表达与ITBL严重程度呈负相关（p=0.025）。3、体外细胞实验结果显示高浓度胆盐及IL-1、PGD2等炎性因子作用均会引起胆管上皮细胞损伤,细胞凋亡增加。4、高浓度胆盐刺激引起胆管上皮细胞内FOXA1和FOXA2表达下调;IL-1等炎性因子作用可引起胆管上皮细胞内FOXA2表达下调。研究结论:1、FOXA1和FOXA2在肝移植后ITBL和非ITBL肝组织中肝细胞和肝内胆管上皮细胞的细胞核均有阳性表达;FOXA1和FOXA2在ITBL肝组织中肝内胆管上皮细胞的表达均明显低于非ITBL肝组织,FOXA1和FOXA2的低表达与ITBL的发生密切相关。2、FOXA2在肝内胆管上皮细胞的表达与ITBL的严重程度呈负相关,ITBL分级越高,FOXA2的表达越低。3、体外细胞实验结果显示高浓度胆盐及IL-1、PGD2等炎性因子作用均会引起胆管上皮细胞损伤,细胞凋亡增加。4、高浓度胆盐刺激引起胆管上皮细胞内FOXA1和FOXA2表达下调;IL-1等炎性因子作用可引起胆管上皮细胞内FOXA2表达下调。5、高浓度胆盐及IL-1等炎性因子可能通过下调肝内胆管上皮细胞FOXA1和FOXA2的表达,调控IL-6的过表达,引起胆管上皮细胞的增生失调,导致肝内胆管的不良增生,促进ITBL的发生。