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猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的猪的一种传染病,对养猪业危害很大。真核细胞中囊泡运输途径主要负责不同细胞器之间的物质运输。Ras相关GTP结合蛋白(Ras-related GTP-binding protein,Rab)与囊泡运输有关,具有调节功能,在囊泡转运过程中发挥重要作用。病毒的生命活动与许多Rab蛋白相互关联,Rab22a为Rab家族小GTP酶成员,在哺乳动物细胞中广泛表达。本团队前期通过酵母双杂交研究发现,CSFV的NS4B蛋白可能与Rab22a存在相互作用。本文就宿主细胞Rab22a与CSFV NS4B蛋白相互作用及对病毒复制增殖的影响进行了研究,获得以下结果:(1)Rab22a与CSFV NS4B存在相互作用。Co-IP试验发现PK-15细胞内Rab22a与CSFV NS4B存在相互作用;GST pull-down试验结果表明了Rab22a与CSFV NS4B之间的作用方式是直接相互作用;激光共聚焦结果显示了Rab22a与CSFV NS4B在PK-15细胞内共定位的现象。(2)Rab22a对CSFV复制具有促进作用。过表达Rab22a时,CSFV RNA表达量在24 h极显著上调(P<0.01)、48 h和72 h显著上调(P<0.05),CSFV E2蛋白在各时间点均极显著上调(P<0.01);干扰Rab22a时,24 h时对CSFV RNA表达无显著影响(P>0.05),48 h时CSFV RNA表达受到显著抑制(P<0.05),72 h时受到极显著抑制(P<0.01),48 h和72 h时CSFV E2蛋白表达均受到极显著抑制(P<0.01,P<0.001);突变体Rab22a Q64L和Rab22a S19N使CSFV RNA和E2蛋白表达在24 h时受到显著抑制(P<0.05),在48 h时Rab22a Q64L使其受到显著抑制(P<0.05)、Rab22a S19N使其受到极显著抑制(P<0.01),在72 h时2种突变体均使CSFV RNA和E2蛋白表达受到极显著抑制(P<0.01)。(3)Rab22a对CSFV增殖具有促进作用。过表达Rab22a显著增加CSFV子代病毒产生(P<0.05),干扰Rab22a显著抑制CSFV子代病毒产生(P<0.05),突变体Rab22a Q64L和Rab22a S19N在24 h显著抑制(P<0.05)、48 h和72 h极显著抑制(P<0.01,P<0.001)CSFV子代病毒的产生。综上所述,本研究表明Rab22a与CSFV NS4B存在相互作用,证明Rab22a对CSFV的复制增殖起促进作用。研究结果为了解宿主Rab22a与CSFV的相互作用及对病毒复制增殖的影响积累了新的科学资料。