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研究背景:肠道缺血再灌注（I/R）损伤在临床比较普遍,导致I/R损伤的原因很多,包括严重创伤、休克等疾病及肠移植、腹血管手术、血液透析等手术及诊疗过程,严重危害患者生命安全,因此有必要对肠道I/R损伤的发生机制进行深入研究。2000年,Salehi等人通过酵母双杂交的方法筛选到了神经生长因子受体作用黑色素瘤抗原基因同源蛋白（neurotrophin receptor-interacting MAGE homology,NRAGE）。NRAGE隶属黑色素瘤抗原（MAGE）家族,能够与神经生长因子的低亲和力类受体p75NTR（p75 neurotrophin receptor）互相作用,在神经前体细胞p75NTR诱导的凋亡中发挥关键作用。NRAGE在发育早期和成年期的许多组织中（如脑、心、肝脏、肾、肌肉、肠）均有表达,但在肠道中发挥的作用尚不明确,本研究就NRAGE是否参与肠道I/R损伤及参与其中的机制展开研究。方法:1.肠上皮细胞（IEC）缺氧模型及大鼠小肠I/R损伤模型,缺氧组:IEC缺氧培养（1%O2,5%CO2）6小时,复氧组:IEC缺氧培养（1%O2,5%CO2）6小时后复氧培养（20%O2,5%CO2）1小时,提取细胞总蛋白、总RNA。SD大鼠麻醉后腹正中切口打开腹壁,夹闭肠系膜上动脉30分钟,恢复血流灌注6小时后处死大鼠,取空肠段组织生理盐水冲洗后制作石蜡切片。免疫印迹、RT-PCR、免疫组化（IHC）检测IEC中NRAGE蛋白及mRNA的表达变化。2.将NRAGE过表达慢病毒（Lv-NRAGE组）、干扰表达慢病毒（sh-NRAGE组）及对照慢病毒（Lv-control组）转染入IEC-6细胞,另设置无慢病毒的对照组（NC组）。48小时后,提取总细胞、总蛋白、总RNA。免疫印迹、RT-PCR检验转染是否成功。3.转染48小时后流式细胞术检验IEC-6细胞的凋亡情况,免疫印迹检测紧密连接蛋白occludin水平变化。4.干扰表达慢病毒（sh-NRAGE组）及对照慢病毒（Lv-control组）转染入IEC-6细胞72小时后,更换无血清的DMEM饥饿细胞8小时,给予外源性BMP2和noggin半小时,检测p-NF-k B水平。结果:1.IEC缺氧培养6小时后,细胞内的NRAGE较对照组表达增加,复氧后又下降,同时IHC观察到,IEC内NRAGE在I/R后较Sham组明显增强。2.转染48小时后,Lv-NRAGE组蛋白及mRNA较Lv-control组明显增多,sh-NRAGE组蛋白及mRNA明显减少,转染成功。3.转染48小时后,较Lv-control组,Lv-NRAGE组细胞早期凋亡率增高,紧密连接蛋白occludin降低,sh-NRAGE组细胞早期凋亡率降低,occludin蛋白升高。4.外源性BMP2上调了NRAGE蛋白的表达,增加了p-NF-kB水平,BMP特异性拮抗剂noggin可逆转此效应,干扰NRAGE后,NF-kB磷酸化水平降低,并且阻断了外源性BMP2引起的p-NF-k B水平增加,BMP拮抗剂noggin蛋白可部分逆转因肠I/R引起的NRAGE蛋白增多。结论:1.缺氧及肠I/R条件下,IEC内的NRAGE蛋白及mRNA表达均上调。且与Sham组NRAGE主要表达于细胞膜不同,缺血再灌注后肠上皮细胞细胞膜及细胞质中均表达了较多的NRAGE。2.NRAGE促进了IEC的凋亡,下调了occludin蛋白的水平,破坏了肠黏膜屏障。3.肠I/R条件下,NRAGE可能通过BMP2介导的非经典信号通路发挥作用。