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目的1.建立间接包被ELISA (enzyme linked immunosorbent assy,酶联免疫吸附试验)检测血清游离β-HCG (free-β-huaman chorionic gonadotropin,F-β-HCG)检测方法。2.探讨降低ELISA试验中非特异反应的方法。3.评估游离β-HCG检测在相关疾病诊疗中的意义。方法1.间接包被ELISA法检测血清游离β-HCG方法学建立(1)BBC酶标反应板的制备,(2)抗游离β-HCG单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb)的生物素化,(3)辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)过碘酸钠法标记抗游离β-HCG多克隆抗体(polyclonal antibody, pAb),(4)间接包被ELISA法检测血清游离β-HCG方法学建立及评价。2.降低ELISA中非特异显色方法学探讨(1)更换标准品稀释液,(2)用连接有包被抗体的亲和层析柱提纯酶标抗体,(3)在酶标抗体中加入包被抗体的Fc段3.血清游离β-HCG与相关疾病的临床研究(1)血清游离β-HCG检测对正常妊娠与异位妊娠的诊断意义,(2)血清游离β-HCG检测在妊娠滋养细胞疾病中的临床意义。结果1.间接包被ELISA法检测血清游离β-HCG方法学建立：通过对该方法中各种反应条件的优化,确定了最适工作条件：生物素抗体和酶标抗体的最适工作浓度分别为1：1000和1：12000,本检测方法具有较好的稳定性,灵敏度0.1ng/ml,回收率95.92%～102.51%,批内差异7.54%～11.12%,批间差异12.51%～18.11%,与FSH、TSH、LH、α-HCG的交叉反应率<0.1%,检测范围0.1～500ng/ml,与进口试剂盒的相关性尚可(r2=0.7892)。2.降低ELISA中非特异显色方法学探讨：结果显示,更换标准品稀释液和用连接有包被抗体的亲和层析柱提纯酶标抗体两种方式对本方法不适用,而向酶标抗体中加入包被抗体的Fc段在本实验中效果显著。3.血清游离β-HCG与相关疾病的临床研究：正常妊娠孕妇血清游离β-HCG水平明显高于异位妊娠患者(p<0.05),妊娠滋养细胞疾病患者血清游离β-HCG水平明显高于正常妊娠孕妇(p<0.05)。结论1.本文研制的间接包被检测血清游离β-HCG方法,引入了生物素-亲合素系统,提高了抗体利用率,在很大程度上降低了“钩状效应”的产生,且灵敏度高、特异性好,具有较好的稳定性和检测范围,适于临床应用。2.本文探讨了三种降低ELISA中非特异显色的方法,均具有一定的应用价值,尤其在酶标抗体中加入包被抗体的Fc段的方法,目前国内尚无相关报道,有待进一步研究。3.血清游离β-HCG的测定为异位妊娠、妊娠滋养细胞疾病等的诊断提供重要依据。