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鱼源胶原蛋白肽已被广泛应用到食品、化妆品等多个领域。相对分子量作为胶原蛋白肽的重要质量指标,与其消化吸收特性及生理活性有密切关系。本论文以罗非鱼鱼皮及鱼鳞为原料,通过可控酶解技术制备不同水解度的鱼胶原蛋白酶解液,分析酶以及水解度对鱼胶原蛋白酶解液分子量的影响,对凝胶色谱法测定鱼胶原蛋白肽分子量分布进行方法验证,对比不同凝胶色谱条件的适用度和精密度,并采用超滤离心法结合质谱验证凝胶色谱条件的准确性。主要结论如下:罗非鱼脱脂鱼皮以及脱钙鱼鳞富含胶原蛋白,粗蛋白含量高达88%。罗非鱼胶原蛋白肽的分子量与酶种类及酶解时间相关,采用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰酶和碱性蛋白酶酶解鱼皮和鱼鳞,探索四种酶的酶解产物的水解度及分子量分布,结果表明对于鱼皮和鱼鳞,胰酶酶解8 h得到的水解产物具有最高的水解度,分别为16.619±0.275%和16.376±0.130%。采用凝胶色谱法测定各酶解产物分子量分布,结果表明水解度越高的酶解产物,相对分子量越小,物质分子量分布越集中,鱼皮胰酶酶解8 h酶解物主要为1,000Da以下的分子,其数均分子量为531.29 Da,重均分子量为799.51 Da,分布宽度系数为1.50。利用方法学研究实验,对比Superdex Peptide HR 10/30与TSK GEL G2000 SWxl G2000色谱柱在不同流动相条件中检测鱼胶原蛋白肽分子量分布的情况。结果表明,杆菌肽以及Gly-Gly-Tyr-Arg两个标准品在磷酸盐缓冲液流动相条件的洗脱特性异常。Superdex Peptide HR 10/30色谱柱检测胶原蛋白肽小分子分布的准确度及精密度较高,加标回收率达到101.90%,RSD值在1%以下;TSK GEL G2000 SWxl色谱柱更适合检测胶原蛋白肽大分子物质,加标回收率达到105.66%,RSD值在0.5%以下。通过超滤离心结合质谱方法,进一步验证凝胶色谱法检测胶原蛋白肽相对分子量分布的准确性,结果表明样品浓度、离心速度及离心时间对超滤离心管分离效果有影响。MALDI-TOF-MS质谱结果表明超滤离心管对胶原蛋白样品分离效果较好。超滤结果与凝胶色谱法结果比较,表明Superdex Peptide HR 10/30色谱柱检测胶原蛋白肽<1,000 Da及<3,000 Da的组分与超滤离心法得出的比例最为接近。