目的:口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是世界范围内最常见的口腔颌面部恶性肿瘤之一。近年来大样本的流行病学研究表明,在中国,OSCC发病率呈逐年上升趋势,且发病年龄日趋年轻化,发病率在3.6/10-8.0/10万之间。因其具有恶性程度高,易发生淋巴结转移,预后差等特点,导致OSCC的5年生存率在50%左右。目前对于OSCC早期诊断及预后的研究较缺乏,当前的研究认为在OSCC发生发展中的基因变化因素主要包括基因突变与表观遗传修饰异常。DNA甲基化的研究可以使我们更好的了解OSCC发生机制,为OSCC的早期诊断及预后提供新的理论基础。现阶段研究表明,基因突变与表观遗传修饰异常是影响OSCC发生的重要因素,表观遗传修饰是一种可遗传、可逆转的生物学行为,主要包括DNA核苷酸胞嘧啶的甲基化修饰、组蛋白修饰、非编码RNA调控等。其中,DNA甲基化的研究成为表观遗传学的研究热点。PRSS8基因又称为人类的前列腺蛋白(Prostasin)或CAP-1,位于染色体16p11.2上,不仅能维持机体的正常生理功能,而且参与生长因子的调节、细胞的迁移多种炎症、表皮生长、肿瘤的发生等过程。近年来研究发现食管鳞癌、结直肠癌等癌组织中存在PRSS8基因甲基化状态及PRSS8mRNA表达异常,PRSS8基因的异常改变有可能参与了癌症的发生。蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22(PTPN22)基因位于染色体1p13.3-13.1上并参与上皮粘附。TCGA数据库显示PTPN22甲基化水平在肿瘤组织与正常组织之间有显著差异。然而,尽管PTPN22基因在癌症发生中有潜在重要性,但是关于它与肿瘤的报道很少。目前尚未发现PRSS8及PTPN22在OSCC中的表观遗传学变化相关报道。本研究以52例OSCC术后标本(河北医科大学第四医院口腔科)为研究对象,通过分析OSCC组织和相应正常黏膜组织中PRSS8及PTPN22基因的启动子区甲基化状态及其mRNA的表达水平,并结合患者的临床病理特征进行统计分析,旨在揭示OSCC的发病机制,为OSCC的早期发现与预后的评估提供实验理论依据。方法:1应用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation Specific PCR,MSP)检测52例经术后病理诊断为OSCC的癌组织及相应正常黏膜组织中PRSS8及PTPN22基因启动子区甲基化状态。2应用逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcriptase-PCR,RT-PCR)技术检测52例术后经病理诊断为OSCC的标本的癌组织及相应正常黏膜组织中PRSS8及PTPN22的mRNA相对表达量。3应用统计软件SPSS21.0对实验结果进行统计学分析。结果:1 OSCC和正常组织中PRSS8及PTPN22基因的甲基化状态52例OSCC组织中PRSS8及PTPN22基因启动子甲基化率分别为57.7%(30/52),51.9%(27/52),52例正常组织甲基化率为34.6%(18/52),30.8%(16/52),经统计学分析,OSCC组织PRSS8及PTPN22基因启动子甲基化率均明显高于相应正常组织,其差异都具有统计学意义(χ~2=5.571,P=0.018;χ~2=4.798,P=0.029)。(Table 1,2)(Fig.1,2)2 OSCC和正常组织中PRSS8及PTPN22基因mRNA的表达情况52例标本中OSCC组织和正常组织PRSS8mRNA的表达量均符合正态分析,PRSS8mRNA的相对表达量为0.44±0.12,相应正常组织的表达量为0.71±0.13,采用配对t检验,PRSS8基因mRNA的相对表达量在OSCC组织中明显低于相应正常组织,其差异具有统计学意义(t=-10.620,P=0.000)。(Table 3)(Fig.3)PTPN22 mRNA的相对表达量为0.44±0.20,相应正常组织的表达量为0.63±0.20,PTPN22基因mRNA的相对表达量在OSCC组织中明显低于相应正常组织,其差异具有统计学意义(t=-4.647,P=0.000)。(Table 4)(Fig.4)3 PRSS8及PTPN22基因甲基化组与非甲基化组中mRNA相对表达量的比较在52例OSCC组织中,甲基化组PRSS8mRNA的相对表达量为0.43±0.12,非甲基化组为0.52±0.11,利用独立样本t检验进行分析,结果显示甲基化组与非甲基化组PRSS8mRNA相对表达量之间的差异具有统计学意义(t=-2.880,P=0.006)。(Table 5)PTPN22mRNA在甲基化组相对表达量为0.47±0.18,在非甲基化组相对表达量为0.56±0.08,甲基化组与非甲基化组中PTPN22mRNA相对表达量之间的差异有统计学意义(t=-2.171,P=0.035)。(Table6)4 PRSS8和PTPN22基因启动子甲基化率与患者临床参数之间的关系男性组PRSS8和PTPN22基因启动子甲基化率分别为53.3%(16/30),46.7%(14/30),女性组甲基化率分别为63.6%(14/22),59.1%(13/22),其差异均无统计学意义(χ~2=0.552,P=0.458),(χ~2=0.785,P=0.376);年龄≥60岁组甲基化率分别为62.5%(20/32),56.3%(18/32),年龄<60岁组患者甲基化率分别为50.0%(10/20),45.0%(9/20),其差异均无统计学意义(χ~2=0.788,P=0.375),(χ~2=0.624,P=0.430);饮酒组甲基化率分别为59.3%(16/27),51.9%(14/27),不饮酒组甲基化率分别为56.0%(14/25),52.0%(13/25),其差异均无统计学意义(χ~2=0.056,P=0.812);(χ~2=0.000,P=0.991);吸烟组甲基化率分别为51.7%(15/29),48.3%(14/29),不吸烟组甲基化率分别为65.2%(15/23),56.5%(13/23),其差异均无统计学意义(χ~2=0.957,P=0.328),(χ~2=0.349,P=0.554);临床Ⅰ期+Ⅱ期组甲基化率分别为38.1%(8/21),28.6%(6/21),临床Ⅲ期+Ⅳ期组甲基化率分别为71.0%(22/31),67.7%(21/31),其差异均有统计学意义(χ~2=5.543,P=0.019),(χ~2=66.589,P=0.000);淋巴结转移组甲基化率分别为73.9%(17/23),65.2%(13/23),无淋巴结转移组甲基化率分别为44.8%(13/29),41.4%(12/29),差异均有统计学意义(χ~2=4.446,P=0.035),(χ~2=2.920,P=0.047)。高中分化组甲基化率分别为47.1%(16/34),41.2%(14/34),低分化组甲基化率分别为77.8%(14/18),72.2%(13/18),差异均具有统计学意义(χ~2=4.550,P=0.033),(χ~2=4.544,P=0.033)。(Table 7,8)5 OSCC中PRSS8和PTPN22基因mRNA相对表达水平及与临床参数之间的关系男性组患者PRSS8和PTPN22mRNA的相对表达量分别为0.44±0.13,0.41±0.19,女性组的相对表达量分别为0.46±0.11,0.49±0.21,差异均无统计学意义(t=-0.586,P=0.560),(t=-1.481,P=0.145);年龄≥60岁组的相对表达量分别为0.45±0.13,0.44±0.20,年龄<60岁组相对表达量分别为0.43±0.10,0.46±0.20,差异均无统计学意义(t=-0.481,P=0.633),(t=-0.451,P=0.654);饮酒组的相对表达量分别为0.43±0.11,0.47±0.22,不饮酒组的相对表达量分别为0.47±0.13,0.42±0.17,差异均无统计学意义(t=-1.197,P=0.237),(t=1.016,P=0.315);吸烟组相对表达量分别为0.44±0.11,0.48±0.22,不吸烟组相对表达量分别为0.45±0.13,0.40±0.18,差异均无统计学意义(t=-475,P=0.637),(t=1.323,P=0.192);根据TNM分期,进行临床分期,其中Ⅰ+Ⅱ期相对表达量分别为0.49±0.11,0.56±0.12,Ⅲ+Ⅳ期分别为0.41±0.12,0.46±0.20,均具有显著差异,差异有统计学意义(t=2.335,P=0.024),(t=2.076,P=0.043)。淋巴结转移组分别为0.42±0.11,0.44±0.17,无淋巴结转移组分别为0.49±0.13,0.55±0.11,差异有统计学意义(t=-2.119,P=0.039),(t=-2.688,P=0.010)。高中分化组相对表达量分别为0.48±0.12,0.57±0.11,低分化组相对表达量分别为0.39±0.11,0.49±0.12,具有统计学意义(t=2.736,P=0.009),(t=2.188,P=0.033)。(Table9,10)结论:1 PRSS8和PTPN22基因在OSCC组织中的mRNA相对表达量明显低于其相应的正常黏膜组织,提示PRSS8和PTPN22基因在OSCC中可能主要起抑癌基因的作用。2 OSCC组织中PRSS8和PTPN22基因启动子区甲基化率明显高于其相应的正常黏膜组织,提示PRSS8和PTPN22基因甲基化可能是OSCC发生的机制之一。3 PRSS8和PTPN22启动子区甲基化率与患者性别、年龄等因素无关,与分化程度、淋巴结转移、病理分级等有关,提示PRSS8和PTPN22基因启动子区甲基化可能与OSCC的预后有关。