论文部分内容阅读
周围神经火器性损伤是种常见战伤之一,随着武器装备现代化,它的发生率也呈现逐渐增高趋势,严重影响部队战斗力。所以有必要采取有效措施来促进其早日康复。研究表明,火器性坐骨神经断裂伤是合并全身创伤的一种特殊类型神经损伤,火器伤不仅严重损害神经再生微环境,而且还严重抑制机体免疫功能,这使得火器性周围神经断裂伤后的修复十分困难。最近对神经-免疫-内分泌网络的研究发现:周围神经损伤后诱发的特异性T淋巴细胞具有从多方面调节神经再生微环境能力而在神经再生中起着重要作用。基于此背景,我们推测:针对火器性坐骨神经断裂伤后损伤特点,对神经损伤后T淋巴细胞功能深入开展研究,并采取免疫调节措施,趋利避害,将为解决火器性坐骨神经断裂伤的修复难题提供良好前景。为此本课题建立针对坐骨神经内自身抗原的免疫耐受、免疫增强动物模型,通过比较不同T淋巴细胞免疫反应对坐骨神经切割伤后神经再生影响,初步阐明T淋巴细胞在神经再生中作用;并将研究结果用于促进火器性坐骨神经断裂伤后的神经修复。本课题研究包括以下三个部分:第一部分 动物模型的建立免疫耐受新西兰兔动物模型的建立(1)用正常成年新西兰兔的坐骨神经匀浆与不完全福氏佐剂制成坐骨神经乳剂。(2)分别用0.1ml/kg、0.5ml/kg二种不同剂量的坐骨神经乳剂对新生新西兰兔进行跖足免疫接种,并在生后3月用同样剂量坐骨神经乳剂再次注射,然后在生后5月建立坐骨神经切割伤模型。通过检测下述指标进行判断:I. T淋巴细胞激活相关指标,包括:①T淋巴细胞CD4+/CD8+比值;②CD25表达水平;③伤后各时相T淋巴细胞增殖能力;④PHA刺激后T淋巴细胞的增殖水平;⑤伤后坐骨神经内T淋巴细胞浸润水平;II.动物发育情况。(3)结果:①分别用0.1ml/kg、0.5 ml/kg二种剂量的坐骨神经乳剂进行上述处理后,二组动物机体免疫系统均不再对坐骨神经内自身抗原产生反应,同时不影响对其他抗原的反应能力;②0.5 ml/kg剂量坐骨神经乳剂影响动物发育。 <WP=11>结论:用0.1ml/kg坐骨神经匀浆乳剂对新生新西兰兔行跖足免疫接种,并在生后3月再次用同样剂量的神经匀浆乳剂进行注射,在伤后5月成功建立针对坐骨神经内自身抗原免疫耐受动物模型。2.免疫增强新西兰兔动物模型的建立(1)成年新西兰兔,在术前1周分别用0.1ml/kg、0.5ml/kg坐骨神经乳剂尾部皮下注射,1周后建立坐骨神经切割伤模型。通过检测下述指标进行判断:I. T淋巴细胞激活相关指标:同上;II. 注射部位情况。(2)结果:①分别用0.1ml/kg、0.5 ml/kg二种剂量的坐骨神经乳剂进行上述处理后,均可在坐骨神经切割伤后的神经组织内诱发更快、更强的T淋巴细胞免疫反应;②应用0.5ml/kg剂量坐骨神经乳剂后,部分动物存在免疫调节功能异常;一些动物注射部位出现糜烂;而应用0.1ml/kg剂量坐骨神经乳剂未出现上述问题。结论:成年新西兰兔,在术前1周用0.1ml/kg坐骨神经乳剂皮下注射,1周后切断坐骨神经后,成功建立针对坐骨神经内自身抗原的免疫增强动物模型。3.坐骨神经火器性断裂伤新西兰兔动物模型的建立(1)用53式滑膛枪对成年新西兰兔坐骨神经投影线中点为靶点发射不同装药量的0.37g三角破片。根据破片飞行特点、能量吸收,神经断裂率,感染率,死亡率等指标,选择出最佳参数,来建立火器性坐骨神经断裂伤的动物模型。(2)结果:使用装药量为0.30g, 初速度为541.4±26.5m/s的三角破片,坐骨神经断裂率高于80%,无严重并发症,伤后15天该组动物全部存活;装药量大于0.35g,初速大于600m/s的破片在引起坐骨神经断裂伤的同时,容易合并股骨骨折及周围组织严重坏死,动物不易长期存活;而装药量小于0.30g,速度小于500m/s的三角破片飞行不稳,坐骨神经断裂率低于40%。结论:质量为0.37g的三角破片,在装药量为0.30g,初速为541.4±26.5m/s,射击距离为1.5m时可稳定造成兔坐骨神经断裂伤,动物能够长期存活,符合实验要求,是一种较好的火器性坐骨神经断裂伤模型。第二部分 T淋巴细胞对坐骨神经切割伤后再生影响1.T淋巴细胞对坐骨神经切割伤后神经再生微环境的影响(1)利用已建立的免疫耐受组、免疫增强组、免疫正常对照组动物模型,建立坐骨神经切割伤模型,检测下列神经再生微环境指标:①T淋巴细胞本身是否能表达NGF、BDNF,以及神经组织内NGF、BDNF水平;②巨噬细胞趋化、吞噬处理变性髓鞘能力;③雪旺细胞增殖水平。 <WP=12>(2)结果:①T淋巴细胞本身可以表达NGF、BDNF等多种NTFs,并提高神经再生微环境内NTFs水平。②T淋巴细胞的激活有利于增强巨噬细胞趋化、清理崩解髓鞘能力。③T淋巴细胞可以促进坐骨神经损伤后雪旺细胞增殖能力。结论:坐骨神经损伤后,由自身抗原诱发的T淋巴细胞具有明显改善神经再生微环境能力。2.T淋巴细胞对坐骨神经切割伤后神经再生影响(1)分别利用已建立的免疫增强组、正常对照组及免疫耐受组动物模型,建立坐骨神经缺损模型,通过硅胶管桥接修复,术后12周检测下列神经再生指标:①神经再生率;②运动神经元HRP阳性率;③神经传导速度;④轴突再生相关形态学指标;⑤腓肠肌湿重恢复率;⑥腓肠肌内AChE水平。(2)结果:免疫增强组神经再生明显优于其他二组,免疫耐受组最差。结论:周围神经损伤后所激发的T淋巴细胞