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第一部分阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎的疗效和耐药率目的研究阿德福韦酯(ADV)单药治疗初治和拉米夫定(LAM)耐药慢性乙型肝炎(CHB)患者的疗效和耐药率。方法59例CHB患者按ADV治疗时机分2组:A组为ADV初治患者20例,B组为LAM耐药患者39例。所有患者口服ADV10 mg/次,每日1次。治程中监测患者肝肾功能、HBV血清标记物、HBV DNA载量。在病毒学突破或不充分应答时提取患者血清HBV DNA采用直接测序法进行耐药变异分析。结果1) HBV DNA载量基线、12周、24周、48周、96周A组分别为(6.41±1.25) log10IU/mL、(4.06±1.44)log10IU/mL、(3.50±1.59)log10IU/mL、(3.42±1.99) log10IU/mL、(2.48±1.03)log10IU/mL;B组为(6.23±0.97)log10IU/mL、(4.06±1.53)log10IU/mL、(3.56±1.04) log10IU/mL、(3.62±1.64)log10IU/mL、(2.92±1.41)log10IU/mL;2) HBV DNA转阴率12周、24周、48周、96周A组分别为10.0%、30.0%、50.0%、53.8%,B组分别为15.4%、23.1%、28.9%、42.1%,两组间相比无统计学差异(P=0.3885);3) ALT复常率12周、24周、48周、96周A组分别为61.66%、72.22%、83.33%、83.33%,B组分别63.63%、69.70%、68.75%、70.00%;4) A组未发现ADV耐药变异;B组患者共有5例(12.82%)发生耐药,24周、48周、72周和96周ADV基因型耐药率分别为2.56%、7.69%、10.26%、12.82%;5)两组患者HBeAg消失、血清转换无显著性差异;6)疗程中1例患者出现中度脱发,继续使用6月后脱发情况好转,未见其他不良反应。结论ADV单药治疗初治和LAM耐药患者均有较好病毒学和生化应答,且两组无统计学差异;LAM耐药患者较初治患者ADV耐药率高。第二部分阿德福韦酯耐药HBV毒株定量检测方法的建立及其应用目的建立定量检测阿德福韦酯(ADV)耐药HBV毒株含量的方法并用于临床分析。方法T-A克隆制备HBV定量、HBV rtA181和rtN236变异定量检测参比品,根据ADV耐药HBV rtA181和rtN236变异特征设计特异引物和Taqman(FAM-TAMRA)探针,通过适时荧光定量PCR方法检测变异株的含量。同时对32例ADV治疗过程中出现病毒学突破、病毒学反弹、不充分应答或部分应答患者血清通过ADV耐药HBV毒株定量检测和直接测序进行比较。结果1)准确性、特异性检测显示本试剂(rtA181试剂、rtN236试剂)对变异株质粒符合率100%;对野生株质粒符合率100%;2)灵敏度检测显示变异株和野生株质粒按1:1000混合时,a/b(HBV DNA定量值与rtA181变异株定量值之比)或a/c(HBV DNA定量值与rtN236变异株定量值之比)小于1000;未服用过ADV药物的临床病人血清的a/b或a/c大于5000;3)根据结果判定标准32例临床病例rtA181位点完全变异株或变异株占10%以上、变异株占10%以下、完全野生株或变异株含量低于检出极限分别为6例、14例和12例;rtN236位点完全变异株或变异株占10%以上、变异株占10%以下、完全野生株或变异株含量低于检出极限分别为1例、7例和24例。4)直接序列分析发现6例患者血清HBV存在rtA181变异,其中1例存在rtA181和rtN236双变异,其他26例未发现ADV耐药相关变异。结论本部分建立的方法能定量检测ADV耐药HBV毒株含量,具有极好的准确性、特异性和敏感性,使用该方法可以更早发现ADV耐药变异。