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总体目标探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对大鼠视神经钳夹伤后外侧膝状体神经元的保护作用及机制。
第一部分绿茶提取物EGCG对大鼠视神经钳夹伤早期外侧膝状体神经元的影响
目的：本部分研究主要观察视神经钳夹伤早期外侧膝状体的改变特点,评价EGCG是否对外侧膝状体神经元具有保护作用。
方法：60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、视神经钳夹+生理盐水组、视神经钳夹+EGCG组,其中正常对照组12只,视神经钳夹+生理盐水组和视神经钳夹+EGCG组分别观察2个时间点,每组每个时间点各12只。分别于视神经钳央伤后1周及2周处死大鼠,通过尼氏染色计数外侧膝状体背侧核(dorsal lateral geniculate nucleus,dLGN)神经元、通过免疫组织化学染色和western blotting观察神经丝蛋白(neurofilament triplet L,NF-L)的表达,并计数外侧膝状体背侧核神经型一氧化氮合酶(neuronal nitricoxide synthase,nNOS)免疫组织化学染色阳性细胞。
结果：视神经钳夹伤后1周及2周,正常对照组、视神经钳夹+生理盐水组、视神经钳夹+EGCG组三个组左侧dLGN神经元数量相比差异无统计学意义(一周:F=0.756,P=0.487,两周:F=0.504,P=0.614),右侧dLGN神经元数量相比差异也无统计学意义(一周:F=0.142,P=0.869,两周:F=0.032,P=0.986),视神经钳夹后1周及2周,正常对照组、视神经钳夹+生理盐水组、视神经钳夹+EGCG组左侧LGN中NF-L的表达量相比差异无统计学意义(一周:F=0.925,P=0.446,两周:F=0.158,P=0.857),右侧相比差异也无统计学意义(一周:F=0.465,P=0.649,两周:F=0.013,P=0.987),视神经钳夹后1周及2周,正常对照组、视神经钳夹+生理盐水组和视神经钳夹生理盐水组、视神经钳夹+EGCG组左侧dLGN的nNOS阳性细胞数相比差异无统计学意义(一周:F=0.918,P=0.421,两周:F=1.929,P=0.180),右侧相比差异也无统计学意义(一周:F=0.008,P=0.924,两周:F=0.791,P=0.472)。
结论：在视神经钳夹伤后1周和2周,外侧膝状体背侧核神经元数量、NF-L及nNOS的表达与正常对照组比较无明显改变,EGCG对外侧膝状体神经元数量、NF-L及nNOS的表达无明显影响。
第二部分绿茶提取物EGCG对大鼠视神经钳夹伤后期外侧膝状体神经元的影响
目的：本部分研究主要观察视神经钳夹伤后期外侧膝状体的改变特点,评价EGCG是否对外侧膝状体神经元具有保护作用。
方法：60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术+EGCG组、视神经钳夹+生理盐水组、视神经钳夹+EGCG组,每组15只。于视神经钳夹伤后4周处死大鼠,通过尼氏染色计数dLGN神经元、通过免疫组织化学染色和western blotting观察NF-L及胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidicprotein,GFAP)的表达程度,并计数外侧膝状体背侧核nNOS免疫组织化学染色阳性细胞。
结果：(1)视神经钳夹后4周,假手术+EGCG组左、右侧dLGN神经元数量与正常对照组左、右侧相比差异均无统计学意义(p=0.906,0.656,SNK-q检验),四个组右侧dLGN神经元数量相比,差异无统计学意义(F=0.475,P=0.703),视神经钳夹+生理盐水组及视神经钳夹+EGCG组钳夹对侧(左侧)dLGN神经元数量均低于正常对照组左侧(p=0.000,0.015,SNK-q检验),而视神经钳夹+EGCG组钳夹对侧dLGN神经元数量高于视神经钳夹+生理盐水组(p=0.007,SNK-q检验)；(2)视神经钳夹+EGCG组钳夹对侧LGN的NF-L表达量高于视神经钳夹+生理盐水组(p=0.002,SNK-q检验)；视神经钳夹+EGCG组钳夹对侧LGN的GFAP表达量低于视神经钳夹+生理盐水组(p=0.004,SNK-q检验)(3)四个组右侧dLGN的nNOS阳性细胞数相比差异无统计学意义(F=0.543,P=0.658),而视神经钳夹+生理盐水组对侧dLGN的nNOS阳性细胞数高于视神经钳夹+EGCG组(p=0.000,SNK—q检验)。
结论：视神经钳夹伤后4周,视神经钳夹对侧外侧膝状体背侧核神经元密度明显降低；EGCG对大鼠视神经钳夹伤4周后外侧膝状体的神经元丧失具有一定的保护作用,这种保护作用可能与EGCG抑制了nNOS的表达有关。