目的 用反相高效液相色谱法(RP—HPLC)进行血浆中烟酸的药物浓度测定,并将建立的方法应用于Beagle犬测定复方烟酸缓释片的血药浓度,计算其药代动力学参数和相对生物利用度,为进一步新药临床研究提供参考。 方法 1.分组与给药 本试验采用双周期交叉试验设计,将8只Beagle犬分成Ⅰ,Ⅱ两组。第一周期,Ⅰ组口服受试制剂复方烟酸缓释片1片(含烟酸500mg/片),Ⅱ组口服参比制剂烟酸普通片5片(100mg/片);第二周期,Ⅰ组服参比制剂烟酸普通片5片,Ⅱ组服受试制剂复方烟酸缓释片1片。两次试验间隔的清洗期为7天,每次试验前Beagle犬需禁食12h,不禁水,给药后4h方可进食。 2.样品采集 于Beagle犬口服给药前(0h)及给药后0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0,5.0,7.0,11.0,15.0和24.0h,由前肢静脉采血1.0 ml,放入经20μl肝素处理过的EP管中混匀,3500rpm离心10min,分离血浆,置于—20℃冰箱保存待测。 3.血浆样品预处理 血浆样品室温解冻后,取200μl各时间点的血浆于1.5ml EP管中,依次加入替硝唑内标溶液40μl,乙醇400μl,涡旋振荡1min,10900rpm离心5min,上清液经0.45μm微孔滤膜过滤后,取20μl直接进样分析。