论文部分内容阅读
背景胆管癌是一种起源于胆管上皮侵袭性极强的恶性肿瘤,占肝胆恶性肿瘤的10%20%[1].流行病学调查显示全球发病率呈上升的趋势,晚期胆管癌预后极差,生存不超过24个月[2].手术切除和肝移植是根治的唯一方法[3]。然而,大多数确诊为胆管癌患者已属晚期,无法施行根治性手术治疗。因此,姑息性治疗如内镜下放置支架、胆肠吻合、光动力治疗（photodynamic therapy,PDT）、化疗和放疗等就显得尤为重要。对于无法手术治疗的胆管癌患者,姑息治疗首要的目的是缓解梗阻性黄疸。由于恶性肿瘤细胞失控生长特性,而引起肿瘤细胞在短时间内堵塞胆管引流管、胆管支架,所以引流操作的成功完成往往不能带来良好的引流效果。化学治疗及放射治疗也被应用于胆管癌的治疗,虽然可以延长生存时间,但由于化学治疗及放射治疗副作用较大,并不能改善生存质量。于是,在胆管癌治疗中,光动力治疗作为一种新的、副作用少、有效的且可反复使用的治疗方法应运而生。它主要包括无毒的光敏剂的注射,接着辅助以一定波长的激光的照射,最后导致肿瘤细胞的凋亡[4]。血卟啉衍生物是临床上最常用的光敏剂,在HPD介导的PDT过程中存在大量的信号分子调节,其中的机制尚未不十分清楚[5][6]。目前公认的主要机制有:1.直接细胞杀灭机制。PDT通过光敏剂吸收光子的能量跃迁到激发态,产生单线态或三重态氧,活性氧成分可直接作用于细胞膜、线粒体、溶酶膜、高尔基体、内质网等直接杀死肿瘤细胞;2.脉管损伤机制。肿瘤组织需要丰富的血供,研究发现,光敏剂可破坏脉管系统,这种效应延迟了肿瘤的生长;3.免疫应答机制。PDT可激活机体的抗肿瘤免疫机制,这一过程是靠急性期蛋白、蛋白酶、过氧化物酶、活性氧等物质完成的。但是,随着PDT越来越广泛应用于恶性肿瘤疾病的治疗,人们逐步认识到单纯应用PDT治疗恶性肿瘤在目前研究背景下有存在以下不足:1.光敏剂的毒性反应;2.光照强度未有统一标准;3.疗效的不稳定性等。所以,如何使光动力治疗在肿瘤中的疗效更确切、治疗效果持续稳定、作用机制更完善等问题是当前的研究热点。通过检索及复习文献,我们发现关于光动力治疗恶性肿瘤的最新研究进展中有,意大利学者Chiaviello[7]等在光动力治疗肺小细胞癌研究中发现,光敏剂结合PDT疗法中,活性氧的形成有效的抑制了蛋白酶体的活性,但同时对蛋白酶体的抑制作用是短暂,不足够使肿瘤细胞因为蛋白酶体活性受抑制而凋亡。那么可以假设,如果采用一种方法或者药物联合光动力治疗使蛋白酶体的活性得到较长时间的抑制,那么就有可能促使肿瘤细胞凋亡。Dikshit等[8]研究发现,在脑神经瘤细胞Neuro 2a和子宫颈癌细胞HeLa中,阿司匹林可以抑制蛋白酶体的功能而引起细胞凋亡。以上文献资料显示:光动力的作用机制中,除了已经被承认的三种以外,有可能还存在光动力可作用于蛋白酶体,影响蛋白酶体的活性而调节在蛋白酶体上降解的蛋白的表达,最终引起肿瘤细胞周期变化及凋亡。又有文献显示,阿司匹林可作用于蛋白酶体,在其他细胞系中,可引起细胞的凋亡。由于光动力治疗和阿司匹林在肿瘤细胞中有共同的作用靶点,联合作用有可能对蛋白酶体的活性抑制更强、时间更持久。本实验正是基于这样的现状,对胆管癌QBC939细胞体外通过单纯光动力治疗对比联合治疗后观察细胞的生长情况,旨在探讨单纯治疗与联合治疗效果对比的差异及其中的可能的机制。目的:探讨光动力治疗联合阿司匹林对胆管癌QBC939细胞周期和凋亡的影响及可能的机制。方法:MTT法检测单纯光动力治疗、阿司匹林治疗、光动力治疗联合阿司匹林对QBC939细胞的生长抑制情况;流式细胞技术检测细胞周期和凋亡的变化;Western印迹法检测细胞周期相关蛋白P27,转录因子相关蛋白IkBα（P27、IkBα都是泛素-蛋白酶体途径的底物）表达的变化。结果:光动力治疗联合阿司匹林对QBC939细胞生长有明显的抑制作用（p-0.01）。流式细胞术实验结果发现,光动力治疗联合阿司匹林可使QBC939细胞G0/G1期比例显著升高（p<0.01）,S期和G2/M期比例下降,并引起细胞凋亡（p-0.01）。光动力治疗联合阿司匹林可使在泛素-蛋白酶体上降解的蛋白P27、IkBα持续表达,与蛋白酶体抑制剂作用后蛋白表达相似。结论:可能的机制是光动力治疗联合阿司匹林持久地抑制泛素-蛋白酶体的活性,上调了P27、IkΒα蛋白表达,使细胞停滞在G1期,转录因子NF-κB不被活化,最后诱导胆管癌QBC939细胞凋亡实现的。