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[目的]
通过研究铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子阳性株群体感应系统基因lasR与Ⅰ类整合子整合酶基因表达的相关性,以及群体感应系统抑制剂对Ⅰ类整合子的影响,初步探讨群体感应系统对Ⅰ类整合子的调控机制。
[方法]
1.采用平皿静止培养法培养铜绿假单胞菌生物被膜,分析该菌群体感应系统信息分子相关基因对其生物被膜形成的影响。
2.采用PCR方法筛选铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子阳性株;采用纸片扩散法(K-B法)测定该菌对13种抗生素的敏感性,分析Ⅰ类整合子与细菌耐药性的关系。
3.采用荧光定量RT-PCR方法检测铜绿假单胞菌群体感应系统信号分子受体基因lasR和Ⅰ类整合子整合酶基因mRNA的表达水平及群体感应系统抑制剂阿奇霉素对Ⅰ类整合子整合酶基因mRNA表达的影响。
[结果]
1.铜绿假单胞菌群体感应系统基因缺陷株与其野生株相比,生物被膜形成能力明显减弱。
2.17株铜绿假单胞菌有7株检测出Ⅰ类整合子,阳性率为41.2%,阳性株与阴性株的耐药率差异有统计学意义(Z=-3.185,P<0.05)。
3.铜绿假单胞菌在生物被膜中群体感应系统lasR基因及Ⅰ类整合子整合酶基因的mRNA表达水平较浮游菌显著升高,两者表达水平呈现正相关性(r=0.695,P<0.05)。
4.阿奇霉素对铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子整合酶基因表达具有明显抑制作用。
[结论]
1.铜绿假单胞菌群体感应系统可调控生物被膜的形成。
2.铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子与细菌耐药性关系密切。
3.铜绿假单胞菌群体感应系统lasR和Ⅰ类整合子整合酶基因mRNA表达水平呈正相关,提示Ⅰ类整合子整合酶基因表达可能与群体感应系统的调控作用有关。
4.阿奇霉素对铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子整合酶基因mRNA表达具有明显抑制作用。结合前期实验结果,初步推断群体感应系统可能对Ⅰ类整合子具有调控作用。