急性冠脉综合征中骨桥蛋白促进Th17细胞分化的机制研究

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目的: Th17细胞是区别于传统Th1和Th2细胞亚群的独立T细胞群,是当前免疫学研究的热点之一。已有大量研究表明Th17细胞能够促进炎症的发生发展,研究也表明在急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者外周血中Th17细胞是显著升高的。磷酸化糖蛋白骨桥蛋白(osteopontin,OPN)分泌增多也和冠状动脉性心脏病尤其是ACS的发生发展有关。但是ACS中OPN对Th17细胞的作用还没见报道,相关的机制也有待进一步探索。本课题通过研究OPN在ACS中对Th17细胞分化的影响,从一个新的角度去探讨AC S的发病机制,为治疗AC S提供新的理论基础。  方法:(1)根据疾病的严重程度,冠状动脉疾病分为两组,分别为ACS组和稳定型心绞痛(stab le a ngina,SA)组。年龄和性别相近的健康体检者作为正常对照。用流式细胞术检测实验组患者和正常人外周血中 Th17细胞和 Treg细胞的数量。(2)用ELISA方法检测血清IL-17、OPN、IFN-γ等相关细胞因子水平。(3)用流式细胞术分选正常人或者 ACS病人的 FoxP3highCD45RA- Treg、FoxP3lowCD45RA+ Treg和FoxP3lowCD45RA-Treg细胞,研究OPN在体外对Th17细胞增殖分化的影响。IL-17、FoxP3以及STAT3和 RORc的表达用胞内染色,通过流式细胞术以及Western Blot检测。  结果:(1)ACS患者CD4+IL-17+T细胞(3.3±1.1%)明显比SA患者(1.5±0.8%)和正常对照(1.2±0.6%)高(P<0.01),而后两组没有统计学差异(P>0.05)。ACS患者CD4+FoxP3+T细胞(4.5±1.2%)比S A患者(6.8±1.5%)和正常对照(7.3±1.6%)减少(P<0.05)。(2) ACS组 CD4+CD45RA+FoxP3low(0.690±0.07%)和CD4+CD45RA-FoxP3high(0.682±0.159%)数量明显少于 SA组(分别为1.2127±0.087%,1.333±0.410%)和正常对照组(分别为1.231±0.203%,1.392±0.231%)(P<0.05)。CD4+CD45RA-FoxP3low各组间没有统计学差别,但是该亚群相比另外两个亚群能表达更多的IL-17。(3)ACS患者血清中能检测出比SA和正常对照更高浓度的IL-17和OPN,而且ACS组OPN水平和IL-17浓度以及Th17细胞数量呈显著相关性。(4)流式细胞术分选的 CD4+CD45RA-FoxP3low T细胞用含高浓度 OPN的ACS血清刺激后表达IL-17明显比用正常对照血清刺激的要多,并且该现象可被OPN抗体所阻断。(5)ACS组STAT3磷酸化水平明显比正常对照组高,且OPN浓度和STAT3磷酸化水平正相关。用ACS血清和OPN刺激的CD4+CD45RA-FoxP3low T细胞STAT3磷酸化水平明显增高,并且该现象可被STAT3抑制剂所阻断。(6)RORc表达水平和STAT3磷酸化呈现相似的变化。(7)阻断OPN受体CD29、CD44后,CD4+CD45RA-FoxP3low T细胞表达IL-17明显减少。  结论:(1)ACS患者外周血Th17细胞数量增加,Treg细胞数量减少,OPN水平和Th17细胞以及 IL-17的量明显正相关。(2)ACS患者 Treg细胞的减少是因为CD4+CD45RA+FoxP3low和 CD4+CD45RA-FoxP3high两群细胞减少而不是CD4+CD45RA-FoxP3low亚群,后者能表达大量 IL-17。(3)ACS患者高水平的 OPN使CD4+CD45RA-FoxP3low T细胞转变为Th17细胞。(4)OPN通过其受体CD29和CD44活化STAT3和RORc信号通路使CD4+CD45RA-FoxP3low T细胞产生IL-17。
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