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金花茶[Camellia petelotii(Merrill)sealy(C.petelotii)]来源于山茶科(Theaceae)山茶属植物的叶,为国家一级保护植物,主要分布在广西、越南等地。野生的金花茶数量极其稀少且分布狭窄,是世界上稀有的珍贵植物。目前金花茶已经在广西防城港大面积培育成功。金花茶有着“东方魔茶”、“植物界大熊猫”、“茶族皇后”等美称,不仅因其美观性,更因其有着极高的药用价值。金花茶作为一种药食同源的植物,收载于《广西壮族自治区壮药标准第二卷》,其叶常用于治疗咽喉疼痛、鼓胀、水肿、小便不利、疮疡、泄泻、痢疾等。现代药理学表明,金花茶叶提取物具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、调节血脂血糖血压等药理活性。据文献报道,目前已从金花茶叶中分离鉴定出多种化学成分,主要有皂苷类、黄酮类、酚酸类、生物碱等种类的化合物。目的:本研究旨在探讨金花茶叶对ALI(Acute liver injury,急性肝损伤)大鼠的保护作用以及其中等极性化学成分对照品,为金花茶叶护肝功能产品的研究与开发提供药理学基础和化学成分对照品。方法:1.用10%乙醇提取金花茶叶,减压回收,冷冻干燥,得CPE(C.petelotii leaves aqueous ethanol extract,金花茶叶乙醇提取物)冻干粉,并通过分光光度法测定CPE中多酚和总黄酮的含量。2.将雄性SD大鼠随机分为六组(n=10):正常组和阴性组(0.5%CMC-Na,5 ml/kg/d),Tiopronin组(20 mg/kg/d)和CPE组(40,80和160 mg/kg/d)。所有组均连续给药7天,在第7天给药后的1 h,正常组大鼠腹腔注射橄榄油。除正常组外,其余所有组的大鼠均腹腔注射CCl4(2 ml/kg,溶解于橄榄油,50%,v/v)。空腹14 h(自由饮水)后,取血和肝脏。采用H&E(Hematoxylin&Hosin,苏木精&伊红)染色进行组织学检查,观察各组大鼠的肝脏病理学改变;使用试剂盒检测血清和肝脏组织中的AST(Aspartate transaminase,谷草转氨酶)、ALT(Alanine aminotransfease,谷丙转氨酶)和MDA(Malondialdehyde,丙二醛)的含量,检测肝组织中的SOD(Superoxide dismutase,超氧化物歧化酶)和GSH(Glutataione,谷胱甘肽)的含量;使用ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay,酶联免疫吸附法)试剂盒检测大鼠血清中ROS(Reactive oxygen species,活性氧)含量以及TNF-α(Tumor necrosis factor-α,肿瘤坏死因子-α)、IL-1β(Interleukin-1β,白细胞介素-1β)、IL-6(Interleukin-6,白细胞介素-6)的蛋白表达;QPCR(Real-time quantitative PCR detecting system,实时定量基因扩增荧光检测系统)分析Nrf2[Nuclear factor(erythroid-derived 2)-like-2 factor,核因子红系2相关因子2]、HO-1(Heme oxygenase-1,血红素加氧酶1)、TNF-α、IL-1β和IL-6的基因表达水平;WB(Western blotting,蛋白质免疫印迹)分析肝脏组织中的p65、p-p65、p-IκBα、Nrf2、HO-1的蛋白水平;采用HIC(Immunohistochemistry,免疫组织化学)法观察肝脏细胞中p65的表达情况。3.采用70%乙醇溶液对金花茶叶进行提取,应用多种不同溶剂系统与色谱分析方法对金花茶叶提取物进行分离,根据物理化学性质性,并依靠1H-NMR,13C-NMR,ESI-MS等谱学数据分析及与标准品对照鉴定等方法对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果:1.CPE中多酚和总黄酮含量分别为34.474±1.026和15.228±0.422 mg/g生药量。2.CPE(80和160 mg/kg)能够有效减轻由CCl4引起组织学的改变,包括坏死、炎症细胞浸润及脂肪变性等;能够降低由CCl4引起的血清和肝组织中的AST、ALT、MDA含量的增加(p<0.05);减少大鼠血清中的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平以及抑制肝脏中调控这些促炎因子的关键蛋白p65、p-p65、p-IκBα的表达(p<0.05)。同时,CPE(80和160 mg/kg)能够增加肝组织中抗氧化酶SOD、GSH的表达(p<0.05),并且上调肝脏中Nrf2和HO-1蛋白的表达。3.从金花茶叶70%乙醇提取物中共分离并鉴定了7个化合物结构。这些化合物的结构包括:1个甾醇类化合物β-谷甾醇(β-sitosterol)(1),1个香豆素类化合物伞形花内酯(umbelliferone)(2),4个黄酮类化合物槲皮素(quercetin)(3)、山奈酚(kaempferol)(4)、表没食子儿茶素[(-)-epigallocatechin](5)、表儿茶素[(-)-epicatechin)](6),1个酚酸类化合物:绿原酸(chlorogenic acid)(7)。这些化合物中,酚类化合物如黄酮类及酚酸类可以成为对照品,为金花茶产品建立质量标准提供对照品。结论:CPE对CCl4诱导的ALI大鼠具有良好的护肝活性,可能与酚类及及总黄酮含量丰富有关。从CPE中等极性部位中分离并鉴定得到7个化合物。本实验的研究结果为金花茶作为一种护肝功能食品或药物的科学开发与利用提供前期科学实验依据和中等极性化学对照品。