基于改性硅胶的多肽微阵列平台建立及其在疟疾抗原表位筛选中的应用

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:v80ak48
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改性硅胶(iPDMS,IntegratedPoly(Dimethysiloxane))是一种三维的表面基底结构,能够有效的防止蛋白的非特异性吸附,是良好的应用于微阵列基底材料。抗原表位作为蛋白抗原性的基础,对于疾病的诊断和治疗至关重要,而抗原表位筛选技术的发展强而有力的推动了抗原表位参与免疫反应机制机理的研究,抗原表位筛选技术能够检测、监测和防治疾病的发生和发展,提供有价值的信息。疟疾尤其是恶性疟疾,是目前世界上对人类危害最为严重的蚊媒寄生原虫病,由于疟原虫的生活周期复杂,抗原具有阶段特异性等特点,疟疾的防治成为世界性的难题之一,目前疟疾表位疫苗是防治疟疾的重要手段,而疟疾抗原表位的筛选对于疟疾表位疫苗的研制会有极大的推动作用。我们基于改性硅胶建立并优化了多肽微阵列平台,将优化后的多肽微阵列成功的应用到疟疾抗原表位的筛选。以疟疾抗原表位筛选为例,证实了我们建立起的多肽微阵列是行之有效的,并能够推广到其他病原虫以及自身免疫疾病的应用中去。   整个平台采用化学发光酶联免疫法进行抗原表位的筛选。从以下6个方面对多肽微阵列平台进行了优化:1)捕获多肽的固定方式;2)多肽点样条件,包括固定浓度、点样密度以及点样流程;3)NHS/EDC活化基底的效率;4)孵育条件的摸索;5)血清稀释液配置的优化处理;6)抗原多肽的定向固定对信号响应的影响。   我们将优化后的多肽微阵列应用于疟疾抗原表位的筛选,并已得到了初步的抗原表位筛选结果,而且同样成功的应用到了其他疾病的抗原表位的筛选中,证明了我们建立的多肽微阵列平台的有效性。
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