【摘 要】
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水稻蔗糖非酵解型蛋白激酶SnRK2(又称胁迫相关蛋白激酶stress-activated protein kinase genes in rice,OsSAPKs)在调控水稻非生物胁迫信号传导中起着重要作用,但其参与生物
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水稻蔗糖非酵解型蛋白激酶SnRK2(又称胁迫相关蛋白激酶stress-activated protein kinase genes in rice,OsSAPKs)在调控水稻非生物胁迫信号传导中起着重要作用,但其参与生物胁迫调控的研究却鲜有报道。本研究以SnRK2家族成员为OsSAPK2(LOC_Os07g42940)研究对象,对其序列进行了分析并构建了进化树进行遗传分析;克隆并构建了该基因的GFP(Green fluorescent protein)载体,进行亚细胞定位;利用酵母双杂交技术和蛋白序列分析对该基因的互作蛋白进行了初步的筛选分析,并对候选互作蛋白基因进行表达分析;利用RNAi技术验证该基因抗病相关功能:构建RNAi载体转化粳稻感病品种9804,并对阳性转基因植株进行抗性鉴定和抗病相关基因的表达分析。主要结果如下:1、OsSAPK2定位于细胞核和细胞质内,可能同时参与细胞核和细胞质内的信号传递及代谢的细胞活动;与OsSAPK1、OsSAPK3同属于Kulik’sⅡ组,含有一个特殊的STYKC结构域,上游的启动子序列含有多个与抗病相关的顺式作用元件,推测OsSAPK2可能参与调控植物的生物调控。2、OsSAPK2-RNAi转基因水稻中OsSAPK2下调表达,人工接种水稻白叶枯病菌后,转基因植株对白叶枯病菌抗性降低;接种白叶枯病菌不同菌株后,OsSAPK2基因的下调表达水平不同,RNAi植株接种P1(PXO61)表型变化差异明显小于接种C2(KS6-6)白叶枯小种,可能由于OsSAPK2在响应不同白叶枯菌小种抗性反应中起到的作用是不同的,也可能是在应对不同病菌生理小种时存在与OsSAPK2基因功能冗余的基因。3、OsSAPK2-RNAi转基因水稻中抗病相关基因OsLRR1、OsHIR1表达水平下降,感病相关基因OsMAPK5表达水平升高,推测该基因可以通过调控多个白叶枯病菌相关基因的表达来参与调节水稻对白叶枯的抗性,是水稻抗白叶枯病反应信号传导途径中的一个正调控因子。4、OsSAPK2具有自激活活性,可能与OsEREBP1等功能蛋白以及其他一些功能未知的蛋白互作,OsSAPK2-RNAi转基因水稻中互作蛋白基因表达与受体有明显差异,可能是由于OsSAPK2-RNAi转基因植株中的OsSAPK2基因不表达而引起的,推测OsSAPK2可能通过与OsEREBP1互作,启动下游病程相关蛋白,增强水稻抗病性。上述结果为进一步研究OsSAPK2调控水稻抗白叶枯病的分子机理提供了信息,同时为研究水稻抗白叶枯病菌的信号通路提高了理论参考。
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