Lipstatin发酵及提取工艺研究

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Lipstatin是微生物来源的脂肪酶抑制剂。其氢化后的产品四氢泥泊司他汀(tetrahydrolipstatin,THL),即奥列司他(Orlistat)被FDA认可用于减肥药上市,且它是仅有的两种药品中稍晚的一种。近年的研究表明奥列司他也是脂肪合成酶的抑制剂。 作为一个全新产品的开发,我们首先建立了一种既方便又较可靠的脂肪酶抑制剂活性的测定方法:然后运用抑制活性为指标从发酵液中分离出了活性成份,该成份经反相柱色谱进一步分离得到的化合物,经高分辨质谱、核磁共振氢谱和碳谱确认为lipstatin。并以此标准物建立了用于产品准确检测的HPLC分析方法。 在分离纯化过程中,从半制备高效液相色谱的分离过程中我们发现了lipstatin的一个新的类似物,其氢谱与lipstatin极其相似,但分子式在高分辨质谱上确认为C29H47NO5,比lipstatin的少2个氢原子。 对以豆油为主要碳源和能源的培养基中lipstatin产生菌的发酵代谢特性进行了研究,提出在发酵前期降低发酵温度,以显著改善生产菌的生理状态,在后期提高温度保证有足够的产物形成速率的发酵调控策略,最终使lipstatin的产量从最初的不到10mg/L提高到了1.32g/L。 研究过程主要研究了lipstatin的提取工艺,提出用丙酮破碎细胞,乙酸乙酯溶液萃取的简便的提取工艺,简化了匀浆过程,提高了提取效率。
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