七种卷柏属药用植物抑制黄嘌呤氧化酶、脂氧化酶和环氧化酶的活性作用研究

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黄嘌呤氧化酶(XOD)、脂氧化酶(LOX)和环氧化酶(COX)是人体中涉及氧化过程的几种重要的氧化酶,这些酶的高度表达,与自由基产生和炎症、硬化、心血管疾病、衰老、癌症等病理过程密切相关。这几种酶的抑制剂对于清除自由基、减少炎症、促进组织修复、控制一些疾病(如癌症、病毒性疾病)的发展具有重要意义。我国卷柏属(Selaginella)植物有60-70种,湖北省的卷柏属药用植物共有14种,广泛用于治疗癌症、病毒性肝炎等多种疾病。药理研究证实,卷柏属药用植物具有广泛的药理活性,尤其在抗肿瘤、抗病毒、降血糖、抑菌与抗炎方面的功能较为显著。并且本属植物普遍含有穗花杉双黄酮等多种双黄酮类抗肿瘤活性成分,还发现具有抗病毒作用的活性成分。为此,对7种卷柏属药用植物进行了黄嘌呤氧化酶、脂氧化酶抑制剂的筛选研究和和下调环氧化酶-2mRNA作用的活性物质研究,并进一步进行了抗肿瘤、抗病毒作用的实验研究,为寻找研制新的抗肿瘤、抗病毒的辅助治疗药物,提供依据。用带有酶动力学分析软件的紫外分光光度计,检测7种卷柏属药用植物的28种提取物、3种总黄酮、8种单体化合物和12个流分在体外对黄嘌呤氧化酶活性的影响。结果显示乙酸乙酯提取物和95%乙醇提取物是抑制XOD的活性部位。3种总黄酮(翠云草总黄酮、江南卷柏总黄酮、细叶卷柏总黄酮)和3种化合物(罗波斯塔双黄酮、2,3-二氢-3’,3”’-双芹菜素和2”,3”-二氢-5,5”,7,7”,4’-五羟基-[3’-0-4”’]-双黄酮)对XOD的抑制作用较强。其中罗波斯塔双黄酮抑制XOD活性的作用最强,与阳性对照品槲皮素相近。实验还表明,垫状卷柏甲醇部位10个流分(Fr1~Fr10)中,Fr5对XOD的抑制活性最强。继续将Fr5分离纯化,则活性降低。说明垫状卷柏双黄酮成分的抗氧化活性不仅体现于单一成分,还体现在它们的整体效应。运用脂氧化酶体外抑制实验,检测7种卷柏属药用植物的28种提取物、12种单体化合物和3个组分对脂氧化酶活性的影响。结果显示乙酸乙酯提取物和95%乙醇提取物(薄叶卷柏除外)是主要活性部位。有6种单体化合物对LOX显示较强的抑制活性,强弱顺序为:圣草酚、穗花衫双黄酮、罗波斯塔双黄酮、罗波斯塔双黄酮-4’-甲醚、2”,3”-二氢-5,5”,7,7”,4’-五羟基-[3’-0-4”’]-双黄酮、2,3-二氢-3’,3”’-双芹菜素。采用RT-PCR技术,测定从细叶卷柏提取的5种化合物对HT-29细胞中COX-2mRNA表达的影响。结果表明:这5种化合物的灰度值分别与其样品终浓度呈负相关。说明穗花杉双黄酮、罗波斯塔双黄酮-4’-甲醚、2”,3”-二氢-5,5”,7,7”,4’-五羟基-6,6”-二甲基-[3’-0-4”’]-双黄酮、2”,3”-二氢-5,5”,7,7”,4”’-五羟基-6,6”-二甲基-[4’-0-3”’]-双黄酮和2”,3”-二氢-5,5”,7,7”,4’-五羟基-[3’0-4”’]-双黄酮这5种化合物,均可在mRNA水平抑制结肠癌细胞COX-2的表达。采用噻唑蓝(MTT)法,观察从细叶卷柏提取的4种化合物对体外培养结肠癌HT-29细胞增殖的影响。结果表明罗波斯塔双黄酮-4’-甲醚、穗花衫双黄酮、2”,3”-二氢-5,5”,7,7”,4’-五羟基-6,6”-二甲基-[3’-0-4”’]-双黄酮和2”,3”-二氢-5,5”,7,7”,4”’-五羟基-6,6”-二甲基-[4’-0-3”’]-双黄酮对HT-29细胞的生长增殖具有明显抑制作用,浓度在12.5μg/mL~100μg/mL时,其作用有量效关系。采用卷柏属药用植物的13种提取物培养CVB3感染的Hep-2细胞,观察比较细胞病变效应(CPE),72h后MTT法测定细胞活性,采用治疗指数(TI=TC50/IC50)作为评价指标来衡量药物对CVB3的抑制效力。结果为薄叶卷柏、蔬叶卷柏、江南卷柏这3种卷柏的乙酸乙脂提取物和95%乙醇提取物、垫状卷柏95%乙醇提取物、细叶卷柏水提物对CVB3病毒具有杀灭或抑制作用,翠云草对病毒没有作用。本研究还表明,乙酸乙酯提取物和95%乙醇提取物是卷柏属药用药物抑制黄嘌呤氧化酶和脂氧化酶的活性部位。有1种化合物2”,3”-二氢-5,5”,7,7”,4’-五羟基-[3’-0-4”’]-双黄酮对黄嘌呤氧化酶、脂氧化酶和环氧化酶这3种酶均具有抑制作用。有2种化合物罗波斯塔双黄酮和2,3-二氢-3’,3”’-双芹菜素对黄嘌呤氧化酶和脂氧化酶均具有明显抑制作用;有4种化合物穗花衫双黄酮、罗波斯塔双黄酮-4’-甲醚、2”,3”-二氢-5,5”,7,7”,4’-五羟基-6,6”-二甲基-[3’-0-4”’]-双黄酮和2”,3”-二氢-5,5”,7,7”,4”’-五羟基-6,6”-二甲基-[4’-0-3”’]-双黄酮对环氧化酶-2具有抑制作用,并能抑制HT-29细胞的生长繁殖。黄酮类化合物是一类作用较温和的成分类型,随着它们抗氧化和清除自由基的作用被深刻认识,它们对人类健康的维护作用也逐渐被越来越重视。上述研究为从卷柏属药用植物多靶点、多途径控制炎症的发展,防止疾病的恶化,以及对科学、合理地整体利用卷柏属植物资源提供了一定的实验依据。
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