论文部分内容阅读
糖类营养转运蛋白GLUT2是家禽肠道中负责转运葡萄糖和果糖的重要载体之一,其表达直接影响肠道糖类营养物质的吸收,最终影响生长速度和饲料转化率的提高。本研究探索了转录因子GATA3和USF-1通过结合GLUT2基因5’端上游顺式作用元件调控GLUT2表达的机制。利用生物信息软件对鸡小肠糖类营养转运蛋白转录调控因子GATA3和USF-1蛋白序列进行相关的生物信息学分析,为认识蛋白的结构与功能提供借鉴；构建真核表达载体pcDNA3.1-GATA3和pcDNA3.1-USF-1,分别对293T细胞进行转染,试验中设置空载体组,转染组,空细胞组。在转染48h后观察细胞形态学变化,通过实时荧光定量PCR检测转染后的细胞中目的基因和GLUT2基因的绝对表达量。研究结果：通过生物信息学软件ExPASy分析得到鸡小肠糖类营养转运蛋白转录调控因子GATA3由444个氨基酸组成,USF-1由310个氨基酸组成,两者为亲水性蛋白,具有不稳定性,均为核蛋白,都不具有信号肽；通过在线软件GOR4分析得到3ATA3和USF-1的二级结构模型；成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-GATA3和pcDNA3.1-USF-1并分别在293T细胞中表达pcDNA3.1-GATA3转染293T细胞试验中,转染组与空载体组、空细胞组(未转染组)相比GATA3的表达量差异呈现极显著(P<0.01), GLUT2的表达量在三组中差异不显著(P>0.05);pcDNA3.1-USF-1转染293T细胞试验中,转染组与空载体组、空细胞组(未转染组)相比USF-1的表达量差异呈现显著(0.01<P<0.05),GLUT2的表达量在三组中差异不显著(P>0.05)。经统计分析,得出以下结论：在239T细胞中表达的转录调控因子GATA3和USF-1,未能引起细胞中糖类营养转运蛋白基因GLUT2表达量的增加。本研究为进一步研究鸡肠道内GATA3.USF-1调控GLUT2的表达和阐明鸡肠道内的营养吸收机制研究奠定了理论和实践基础。