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黑木耳(Auricularia auricular judae)隶属于担子菌门、伞菌亚门,是我国珍贵的药食两用大型真菌,具有丰富的营养成分,其含有的多糖具有多种生物活性功能。大量研究表明,黑木耳多糖具有调节免疫力、抗肿瘤、抗炎等生物活性功能。目前研究黑木耳多糖的免疫调节活性尚不全面,且对免疫调节活性的构效关系研究更是罕见,为此,本文以黑木耳为原料,对黑木耳多糖的提取分离纯化、免疫调节活性及基本结构表征进行了研究,主要结果如下:(1)选择液料比、搅拌转速、提取时间、提取温度和颗粒大小分别进行单因素实验考察对黑木耳多糖得率的影响,在单因素实验基础上,选取颗粒大小(目数)、液料比、搅拌转速、提取时间4个因素为考察因素,进行L9(34)正交设计,得到黑木耳多糖的最优提取条件为原料颗粒大小为80目,液料比为30:1(ml/g),沸水浴加热,搅拌转速为200r/min,提取70 min。在此条件下,黑木耳粗多糖的提取得率在8%以上。(2)按最佳提取工艺条件对黑木耳进行提取,提取液经脱蛋白、去除小分子后,采用不同浓度的乙醇浓度分步醇沉,透析、冻干后得到两种黑木耳多糖,命名为AAP-10、AAP-80,采用苯酚硫酸法和硫酸咔唑法测定了多糖含量和糖醛酸含量,结果为分别为96.35%和98.36%;糖醛酸含量分别为23.76%和30.14%。(3)两种黑木耳多糖采用DEAE-52阴离子交换柱和葡聚糖凝胶柱分离纯化后,各得到主要纯化组分,组分均一,分别命名为AAP-10-Se和AAP-80-Se。(4)采用环磷酰胺免疫抑制小鼠模型研究了AAP-10-Se和AAP-80-Se的免疫调节活性。结果显示两种多糖组分提升脾脏指数、增强小鼠巨噬细胞的吞噬功能、NK细胞活性以及脾淋巴增殖能力,说明这两种多糖对特异性免疫细胞和非特异性免疫细胞均有作用,可被开发为免疫调节剂,且以AAP-10-Se的效果更好。(5)紫外光谱扫描结果表明两种多糖组分均不含有核酸和游离蛋白;红外光谱扫描结果显示两种多糖具有多糖特征吸收峰,而且具有β吡喃糖苷键的特征吸收峰。(6)纯度鉴定和分子量测量采用HPGPC方法,结果发现两种多糖组分均一,AAP-10-Se数均分子量和重均分子量分别是6.56×105 Da和4.44×106 Da;AAP-80-Se的数均分子量和重均分子量分别是3.75×105 Da和1.49×106 Da,AAP-10-Se的分子量比AAP-80-Se的大。(7)采用PMP柱前衍生-高效液相法和糖腈乙酰化气相法对两种多糖的单糖组成进行分析,PMP柱前衍生化法分析结果表明,AAP-10-Se主要由甘露糖和葡萄糖组成,单糖相对含量为14.34%:85.66%;而AAP-80-Se主要由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖和木糖组成,单糖相对含量为53.6%:12.5%:25.71%:8.2%。糖腈乙酰化气相法分析结果表明,AAP-10-Se的单糖种类及各单糖相对含量为甘露糖和葡萄糖(20.4%:79.6%);而AAP-80-Se的单糖种类及相对含量比为木糖、甘露糖和葡萄糖(8.33%:69.44%:22.33%)。两种分析结果均表明,AAP-10-Se中主要由葡萄糖组成,而AAP-80-Se中甘露糖占比最高,且含有葡萄糖醛酸,为酸性杂多糖。(8)扫描电子显微和X射线粉末衍射分析结果表明两种多糖均为无定型非晶体结构。