V-ATP酶(vacuolar ATPase)广泛存在于真核生物内膜系统上，是一种利用其自身水解ATP所释放的能量来转运H+的酶，对于维持细胞内环境的稳定，保持细胞正常的生理状态至关重要。RAVE(regulator of the H+-ATPase of the vacuolar and endosomalmembrane)由Rav1p、Rav2p、Skp1p三个亚基组成，是V-ATP酶活性调节机制中一个关键的多亚基复合物调节因子，起到调控V-ATP酶的可逆分离与结合的作用。本研究通过亲和层析的方法从酿酒酵母BY4742FLAG-RAV2中纯化出RAVE复合物及其相关蛋白，利用蛋白免疫印迹技术对目的蛋白FLAG-Rav2p进行了检测；并通过质谱技术对纯化蛋白进行鉴定，发现纯化蛋白中除了有RAVE的三个亚基Rav1p，Rav2p以及Skp1p外，还包括V-ATP酶的A亚基(Vma1p)、B亚基(Vma2p)、E亚基(Vma4p)以及D亚基(Vma8p)，同时还发现α-异丙基苹果酸异构酶(Leu1p)能够与RAVE相互作用。为了进一步研究Leu1p与RAVE的相互关系，通过融合PCR及同源重组的方法，构建了四株缺陷型重组菌株：酿酒酵母BY4742rav1，BY4742rav2，BY4742leu1以及BY4742vma2。进一步研究重组菌株对pH及CaCl2的耐受能力发现：leu1缺陷型菌株(Leu1p缺失)的生长状况与rav1、rav2缺陷型菌株的生长状况基本一致，而与vma2缺陷型菌株有较大差别，表明RAVE对V-ATP酶的活性调控极有可能需要通过与Leu1p结合才能得以实现。本课题的研究成果为进一步研究RAVE复合物与Leu1p的相互关系及其对V-ATP酶的活性调控提供了重要依据。