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α-淀粉酶是一种重要的工业用酶，一般采取筛选高产α-淀粉酶菌株或利用基因工程技术构建α-淀粉酶分泌型工程菌规模生产，以满足工业生产的需求。本文利用低温显色法和摇瓶发酵法，从样品中筛选出一株产α-淀粉酶菌株XL-15，初测酶活力达到30.0U/mL。通过菌落形态、菌体特征观察以及16S rDNA序列比对鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis XL-15)。发酵粗酶液经硫酸铵初步沉淀、透析脱盐后，对其基本酶学性质进行了初步分析。结果表明所产α-淀粉酶最适反应pH和温度分别为6.5和50℃，Ca2+、Mn2+对该酶有激活作用，而Cu2+、Zn2+和EDTA对其有抑制作用，酶动力学实验测得的米氏常数Km值为1.726mg/mL。
本研究以B. Subtilis XL-15基因组DNA为模板，运用PCR方法成功克隆了α-淀粉酶基因。该扩增片断中含α-淀粉酶基因自身信号肽序列，开放式阅读框(ORF)大小为1980bp，编码659个氨基酸残基。将该结构基因分别转入大肠杆菌表达载体pET-28a(+)和毕赤酵母表达载体pPIC9K中，构建重组表达质粒pET28-Amy和pPIC9K-Amy，分别转化大肠杆菌BL21(DE3)和毕赤酵母GS115感受态细胞，并进行诱导培养表达。结果表明：大肠杆菌菌体破碎上清液中未检测出酶活性，SDS-PAGE电泳分析显示表达产物均以无活性的包涵体形式存在；而毕赤酵母在α-Factor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下，利用甲醇进行诱导，经高密度培养后表达产物分泌至胞外，发酵液酶活力检测为4.3U/mL，实现了B. Subtilisα-淀粉酶基因在毕赤酵母中的分泌表达，为α-淀粉酶基因在毕赤酵母中表达做了有益探索。