肝癌患者CIK诱导及细胞毒作用的实验与临床研究

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目的 在建立稳定表达多药耐药基因(MDR1)人肝癌Bel-7402耐药细胞株的基础上,观察肝癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)在体外诱导的CIK对耐药肝癌细胞的细胞毒作用和在肝癌病人中的应用效果。 方法 1.通过阿霉素(Adriamycin,ADM)长期培养筛选建立Bel-7402耐药细胞株;2.在体外分别诱导正常组和肝癌患者组CIK;3.应用MTT法检测CIK对肝癌细胞系Bel-7402的细胞毒作用。4.在实验研究的基础上,对11例肝癌术后病人使用CIK的疗效进行观察。 结果 1.患者组的CIK和正常组细胞表面标志上无差异,CD3+CD56+细胞扩增倍数达600倍以上;2.通过药物排泄实验、流式细胞仪(FCM)检测PgP功能及细胞表面标志、RT-PCR检测MDR1mRNA基因表达等证明耐药细胞的MDR1基因表达及PgP功能增强;3.患者组CIK对肝癌细胞Bel-7402及其耐药株杀伤能力无差异,均为50%左右,与正常组相同。对正常胎肝细胞系L-02的细胞毒作用<10%;4.在11例肝癌术后病人中有16次CIK输注,病人的全身情况得到改善且无不良反应,2例AFP mRNA阳性病人,CIK输注后一月复查为阴性。病人的AFP及sICAM-1均有明显下降。1例CIK治疗后肝脏标本见肿瘤组织呈结节状,肿瘤组织中及瘤结节间可见大量淋巴细胞及组织细胞浸润。免疫组化显示治疗后CD45、CD3、CD45RO、CD68明显增加。 结论肝癌患者CIK和正常人CIK一样对肝癌细胞有很强的细胞毒作用,对正常肝细胞无损伤,并且对耐药肿瘤同样有效,在临床应用中进一步证实应用CIK治疗肝癌术后病人是安全的,有一定的治疗效果,有助于预防或防止肝癌的复发和转移,具有广阔的临床应用前景。
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